新的抑癌候选基因NDRG2对前列腺癌的增殖抑制作用

摘要

研究背景及目的：
　　前列腺癌是欧美国家男性最常见恶性肿瘤，高居致死恶性肿瘤的第二位。近年来在我国有逐年增加的趋势。如果前列腺癌能够被早期诊断，并采取积极的根治术、雄激素阻断治疗或放射治疗，前列腺癌患者会获得更好的预后和更高的生存率。但是不幸的是，多数前列腺癌发现是已经处于晚期，错过了最佳的治疗时机，最终由于对激素的非依赖性，而导致肿瘤的进展恶化而导致肿瘤的不可治愈，导致患者死亡。所以说找到有效的前列腺癌早期诊断和治疗的方法至关重要。
　　NDRG2最初在N-Myc基因敲除小鼠中必备发现，并被命名为N-Myc下游调节基因。NDRG家族包括四个成员，NDRG1,NDRG2,NDRG3andNDRG4。NDRG家族的四个成员的氨基酸同源性达到了57-65％，表明NDRG家族的结构保守，可能有着重要的功能。人源NDRG2是我校生化实验室首先发现并命名的(AF159092)，并被证明是新的抑癌候选基因。NDRG2位于14q11.2包括16个外显子和15个内含子。NDRG2mRNA全长2024个bp，编码含有357个氨基酸序列的功能未知蛋白(41kDa)。前期研究发现NDRG2的表达在一系列的肿瘤组织中表达降低，这些肿瘤包括结肠癌、甲状腺癌、胶质细胞瘤和肾透明细胞癌，这表明NDRG2在肿瘤的发生发展过程中可能发挥重要的作用。同时还有证据证明NDRG2参与了细胞增殖和分化的调节。NDRG2能够调节肌原细胞的增殖，诱导树突状细胞的分化。
　　由于NDRG2是这样一个可能参与肿瘤发生发展的重要基因，而目前国内外尚无NDRG2和前列腺癌相关性的报道，所以我们决定检测NDRG2在前列腺癌组织中的表达情况，研究其在前列腺癌发生发展过程中起到的作用。
　　研究方法及内容：
　　本研究先采用免疫组织化学方法对144例前列腺肿瘤（37例前列腺增生组织/107例前列癌组织）组织染色，检测NDRG2在前列腺肿瘤中的表达情况。采用RT-PCR和Westernblot方法检测不同前列腺癌细胞系中NDRG2的表达水平。采用腺病毒介导的方式实现NDRG2在前列腺癌PC3细胞中的瞬时过表达，并考察其过表达对PC3细胞增殖的影响，检测的方法包括绘制细胞、肿瘤生长曲线，免疫组化，流式细胞仪，透射电镜和TUNEL染色。
　　实验结果：
　　结果表明NDRG2在前列腺癌组织中的阳性表达率和表达水平均远远低于前列腺增生组织(χ2=25.98,p＜0.001)，并且NDRG2的表达水平与前列腺癌的Gleason评分呈负相关（r=－0.445,p＜0.001)，与相应前列腺癌组织中c-Myc的表达呈负相关(r=－0.311,p<0.001)。其表达水平与前列腺癌的pTNM分期和血清PSA无关(P>0.05)。前列腺癌细胞系中的NDRG2表达水平低于人正常唾液腺细胞，其中PC3细胞中表达水平的最低，pAd-cmv-NDRG2腺病毒介导的PC3细胞中NDRG2的过表达，在细胞实验和动物实验中都表现出对细胞的增殖抑制作用，并可调节细胞G1期相关因子（CyclinD1、CDK4）和凋亡相关因子（p21）的表达。
　　结论与提示：
　　NDRG2可能参与了前列腺癌的发生发展，其表达受c-Myc的调控，腺病毒介导的NDRG2的高表达可以抑制前列腺癌细胞在体外和裸鼠活体内的生长其作用很可能是通过调节细胞周期和凋亡相关因子(cyclin-D1,C-DK4和p21)来实现的。结果表明NDRG2作为抑癌候选基因的设想是切实可行的，NDRG2有可能成为前列腺癌诊断和治疗的新靶点。

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缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文 献 回 顾

一、PCA 现代医学研究新进展

二、NDRG2 的现代医学研究进展

正文

技术路线

主要实验材料

主要试剂配置方法

实验一 NDRG2 在前列腺肿瘤组织中的表达分析

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 NDRG2 对前列腺癌细胞系 PC3的增殖抑制作用

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢