角蛋白17(K17)作为自身抗原在银屑病发病机制中的作用研究

摘要

银屑病是一种常见的，易反复发作的慢性炎症性皮肤病，是Th1/Th17细胞共同介导的自身免疫紊乱。白介素17(IL-17)是辅助性T细胞亚群之一Th17细胞分泌的主要细胞因子，在银屑病的发病中占有重要的地位，它和IFN-γ都被认为是“银屑病的关键细胞因子”。IL-17信号转导机制包括3条途径：JAK/STAT、NF-κB和MAPK，其中，JAK/STAT与银屑病角质形成细胞（KC）关系密切。角蛋白17（K17）是“银屑病相关性细胞角蛋白”，与链球菌M蛋白具有相同的序列ALEEAN，可特异刺激银屑病T细胞，使之活化、释放IFN-γ等炎症因子，而IFN-γ又能够经STAT1信号通路上调K17的表达，使机体产生针对K17的自身免疫反应，从而形成了一个恶性环路，导致炎症反应和KC异常增生等病理改变，成为银屑病发病过程中的关键环节。因K17在银屑病皮损的高表达以及其具有刺激T细胞活化的作用，被界定为银屑病自身反应性T细胞识别的候选靶抗原。我们以往的研究已经证明在银屑病的病理过程中存在“K17—T细胞─细胞因子环路”，该环路可能是银屑病皮损持续存在和反复发作的重要基础。
　　本研究在此基础上首次提出并验证IL-17是该环路中的重要细胞因子成员，观察IL-17诱导表皮角质形成细胞(KC)表达K17的作用及其调控的信号转导机制，进一步深入探讨K17作为自身抗原在银屑病发病过程中的意义，从而加深对银屑病发病机理的认识，并为银屑病的治疗提供新的思路。
　　主要实验方法及结果如下：
　　1）使用DMEM/10％FBS培养基培养HaCaT细胞；
　　2）以10U/mL、50U/mL、250U/mL和500U/mL的IL-17分别作用于培养的HaCaT细胞，以IFN-γ处理的HaCaT细胞为阳性对照，不施加任何干预的HaCaT细胞作为空白对照。培养24～72小时后收获细胞，并分别提取RNA和蛋白质用于K17表达水平的检测；
　　3）用实时荧光定量RT-PCR、ELISA、Westernblot、共聚焦免疫荧光等方法从mRNA和蛋白水平测定K17的表达水平，筛选IL-17诱导K17表达的最佳浓度，观察是否呈剂量依赖关系；
　　4）以筛选得出的最佳浓度的IL-17处理培养的HaCaT细胞；
　　5）用抗STAT1和STAT3及各自的磷酸化产物的抗体与HaCaT细胞共同孵育，ELISA、Westernblot、免疫荧光方法筛选在HaCaT细胞表达的信号分子；
　　6）未处理的HaCaT细胞分别加入相应的信号分子抑制剂Fludarabine和Piceatannol孵育2小时，再加入IL-17培养HaCaT细胞，12～24小时后利用实时定量RT-PCR、ELISA、Westernblot、免疫荧光等方法观察信号分子抑制剂各自对IL-17诱导K17表达的影响；
　　研究结果：IL-17以剂量依赖的方式诱导体外培养的HaCaT细胞表达K17，其调控K17表达的机制是经STAT1和STAT3两个信号转导通路实现的。
　　本研究首次发现了调控K17表达的一个新的通路——IL-17诱导KC表达K17，明确了IL-17调控K17表达的主要信号转导机制是经STAT1和STAT3信号通路，进一步完善了“K17─T细胞─细胞因子环路”及其在银屑病发病中的意义，初步阐明了K17作为自身抗原在其中的作用。研究结果不仅深化了对银屑病发病机制的认识，也为银屑病的治疗提供了新的思路。

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缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

一．银屑病的发病机制

二．IL-17 是与银屑病发病相关的关键细胞因子之一

五．展望

正文

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢