高压氧对成年大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

摘要

脑血管病是当前严重威胁人类健康的一种疾病，其中以缺血性脑血管病最为常见。近年来的研究表明高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）对治疗脑缺血性疾病有良好的效果，能够明显减轻脑水肿，减小梗塞灶体积，改善神经功能，但具体机制尚未明确。随着神经干细胞（neural stem cells，NSCs）概念的提出和研究的进展，越来越多的学者开始将HBO与NSCs联系起来，以期通过HBO对NSCs的影响来阐述其治疗缺血性脑损伤的机制。但由于动物实验模型选择的不一致，HBO治疗时程的差异等原因，目前尚无明确的结论。
　　本实验采用成年大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，通过观察HBO治疗对成年大鼠脑缺血再灌注后NSCs增殖的影响和血管内皮生长因子（VEGF）的影响，为进一步阐明HBO治疗脑缺血再灌注损伤的机制提供新的实验依据和新的思路。本实验选用成年SD大鼠，随机分为假手术组（sham surgery，SS），缺血再灌注组（ischemia-reperfusion，IR）和高压氧治疗组（HBO）。采用线栓法制作大鼠MCAO模型，持续缺血1.5h后再灌注。通过氯化三苯四氮唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色观察HBO对缺血再灌注后不同时间点大脑梗死率的影响，通过免疫组织化学染色，观察HBO对不同时间点脑缺血区NSCs增殖情况的影响，以及HBO长期（30d）治疗后对脑缺血区血管生成的影响。
　　本实验结果如下：
　　（1）TTC染色显示，SS组未发现梗死灶，HBO组缺血再灌注后不同时间点脑梗死率较IR组均有所减小，其中，在11d和31d点减小最为明显（P＜0.05）。
　　（2）缺血再灌注后不同时间点IR组和HBO组皮层与纹状体BrdU和Nestin阳性细胞数目与SS组相比均显著增多（P＜0.05），且细胞阳性反应增强；HBO组与IR组相比，在11d和31d点BrdU和Nestin阳性细胞数目均显著增多（P＜0.05）。
　　（3）VEGF在三个组中均广泛分布，HBO治疗30d后，HBO组VEGF阳性表达与IR组相比明显减少（P＜0.05），但两组均高于SS组（P＜0.05）；CD34在SS组未见表达，在HBO组表达少于IR组，但无显著性差异（P＞0.05）。
　　总之，本实验的结果表明，HBO对成年大鼠脑缺血再灌注损伤后NSCs的增殖有促进作用，从而介导其发生迁移和分化，并且长期HBO治疗可使缺血脑组织中VEGF的表达下调，既能保护神经元、促进神经再生，又能减轻缺血后的脑损伤，有利于脑组织的修复和神经功能的恢复。

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文献回顾

1 脑缺血再灌注损伤

2 模型的建立

3 高压氧

4 神经发生

5 血管生成

正 文

实验一 高压氧对成年大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞的影响

1 引言

2 材料

3 方法

4 结果

5 讨论

实验二 高压氧对成年大鼠脑缺血再灌注损伤后脑血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响

1 引言

2 材料

3 方法

4 结果

5 讨论

小结

参考文献

附录

致谢