癫痫模型的中枢神经系统脱髓鞘改变及其对癫痫治疗意义的研究

摘要

目的：
　　癫痫是一种慢性的神经系统疾病，主要以反复出现的自发性发作为特点。同时，这种自发性再发作在中枢神经系统的脱髓鞘疾病中又有一个较高的发生率。并且，国际上有报道提示在一些癫痫患者的中枢神经系统中发生了脱髓鞘改变。上述现象提示脱髓鞘改变与癫痫发作之间存在着某种联系，但是，目前尚没有确凿的实验证据来支持二者之间的联系。本研究希望通过建立大鼠急慢性癫痫模型、脑电监测、免疫蛋白定量分析，酶联免疫吸附试验测定和免疫组织化学等方法，检测癫痫发作是否可以使模型动物的中枢神经系统发作髓鞘改变，进而探讨其可能的发生机制和对癫痫发作的影响。
　　方法：
　　1．急性青霉素癫痫模型中髓鞘改变的研究：通过单次皮层内注射青霉素建立SD大鼠急性癫痫模型，以行为学和脑电监测确定模型成功后，通过WesternBlot方法检测模型大鼠海马与大脑皮层的髓鞘碱性蛋白（MBP），来观察中枢神经系统的髓鞘改变情况。
　　2．慢性戊四氮癫痫模型中髓鞘改变的研究：通过系统性给予大鼠腹腔注射阈下剂量的戊四氮（PTZ）建立慢性癫痫模型，以行为学和脑电监测确定模型成功后，通过在2周、4周和6周三个时间点进行WesternBlot检测模型大鼠海马与大脑皮层的MBP，来观察中枢神经系统的髓鞘有无破坏。
　　3．慢性戊四氮癫痫模型中髓鞘改变发生机制的研究：通过免疫组织化学荧光染色检测正常与模型组大鼠海马与大脑皮层是否存在NG2阳性细胞表达差异，以期观察髓鞘改变与少突胶质细胞的可能关系；通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测正常与模型组大鼠血清中抗MBP抗体的水平，以期观察髓鞘改变与免疫反应的可能关系；通过在2周、4周和6周三个时间点观察正常与模型组大鼠尾静脉注射伊文氏蓝（EB）后海马与大脑皮层脑组织切片血脑屏障（BBB）通透性的变化，以期观察髓鞘改变与BBB损伤的可能关系；综合以上方法阐明PTZ诱导大鼠慢性癫痫发作过程中髓鞘破坏的发生机制。
　　4．脱髓鞘治疗药物癫痫发作预防作用的研究：通过预防性给予治疗剂量脱髓鞘疾病免疫调节剂醋酸格拉替雷（GA），观察系统给药后由PTZ诱导的大鼠慢性癫痫发作行为学表现和脑电监测结果的变化，进而探讨药物对抗髓鞘破坏在癫痫发作中的保护作用。
　　结果：
　　1．急性青霉素癫痫模型中髓鞘未受影响：行为学和脑电记录结果显示青霉素成功诱导大鼠急性癫痫发作，但是WesternBlot结果显示模型组大鼠海马与大脑皮层未观察到MBP的表达变化，说明青霉素急性癫痫模型中髓鞘未受到影响。
　　2．慢性戊四氮癫痫模型中髓鞘发生破坏：行为学和脑电记录结果显示PTZ成功诱导大鼠慢性癫痫发作，随着PTZ给药时间的延长，癫痫发作的程度加重、频率增高。2周、4周和6周三个时间点的WesternBlot检测结果发显示，模型组大鼠海马与大脑皮层的MBP表达均较正常对照组减少，但是三个时间点之间的模型组MBP表达没有统计学差异，说明髓鞘在PTZ诱导的大鼠慢性癫痫发作过程早期即发生破坏性改变。但是，这种改变并没有随着PTZ诱导癫痫发作的加重而进一步恶化。
　　3．慢性戊四氮癫痫模型中髓鞘破坏的可能机制：通过免疫组织化学荧光染色方法，本研究证实PTZ诱导大鼠慢性癫痫发作早期出现的髓鞘破坏不是继发于少突胶质细胞本身的破坏；而PTZ诱导大鼠慢性癫痫发作过程中出现血脑屏障通透性增高和外周血液循环中产生针对大鼠自身中枢神经系统的抗MBP抗体，这两项结果提示自身免疫反应可能是PTZ诱导大鼠慢性癫痫过程中髓鞘破坏的原因。
　　4．GA对PTZ诱导的大鼠慢性癫痫发作的预防治疗效果：在2周、4周和6周三个时间点对大鼠行为学观察统计结果显示，GA预防治疗组大鼠的癫痫发作频率均低于对照组，并且三个时间点之间癫痫发作频率没有显著差别，说明GA将癫痫发作控制在较低水平；但是，脑电图监测结果显示，GA治疗组的自发性癫痫样放电与对照组之间没有统计学差异，说明GA对PTZ诱导的大鼠慢性癫痫发作的自发性癫痫放电没有影响。
　　结论：
　　1．通过观察急慢性癫痫模型中的MBP的变化，本研究首次发现青霉素诱导大鼠急性癫痫发作中未存在髓鞘破坏，而PTZ诱导大鼠慢性癫痫发作中存在中枢神经系统髓鞘破坏；且进一步证实此髓鞘破坏不是来源于少突胶质细胞的破坏，而很可能是由于慢性癫痫发作所引起的自身免疫反应造成的。
　　2．首次证实对PTZ诱导大鼠慢性癫痫发作中给予脱髓鞘药物GA的预防性治疗可以显著改善行为学指标，为癫痫病人的药物治疗提供了可能的新方向。

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缩略语表

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前言

文献回顾

1 癫痫概述

2 癫痫流行病学

3 癫痫发病机制

4 髓鞘形成和脱髓鞘疾病

正文

第一部分 急慢性大鼠癫痫模型中海马与皮层的髓鞘变化

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 戊四氮大鼠模型中海马与皮层髓鞘破坏机制的研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第三部分 醋酸格拉替雷预防戊四氮诱导慢性癫痫发作的研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

附录

个人简历和研究成果

致谢