盐酸伊伐布雷定片人体药代动力学研究

摘要

伊伐布雷定是法国Servier公司首先研制开发的抗心绞痛新药，大量研究证实其安全有效性，2005年11月经欧洲药审局批准在欧洲27个国家上市，用于治疗对β受体阻断剂禁忌或不能耐受的慢性稳定性心绞痛。该药是首个选择特异性心脏起搏电流（If）抑制剂，起到减缓窦房结起搏点活动速度的作用，与传统药物相比，其作用机理不影响血压、血流动力学、心肌收缩力、房室传导或心室复极。
　　目的：目前国内文献尚未有关盐酸伊伐布雷定片的人体药代动力学的报道，本研究拟探索并建立LC-MS/MS法(高效液相色谱-串联质谱法)检测人血浆中伊伐布雷定的方法，并将该方法应用于对单次及多次给药后伊伐布雷定在健康人体内的药代动力学特征的研究，首次阐明盐酸伊伐布雷定片在中国健康受试者中药代动力学特征，探讨药物在人体内的吸收、分布、代谢和排泄的动态变化特点，阐明其处置规律，为盐酸伊伐布雷定片的Ⅱ期临床试验研究设计和给药剂量方案的确定提供参考依据，为其临床应用提供理论依据。
　　方法：本研究分以下三部分
　　第一部分：建立特异性好、灵敏度高、重复性强、准确性好的LC-MS/MS检测方法。检测步骤：于10mL离心管中精密加空白血浆样品1mL，内标溶液(2?g·mL-1)50?L，旋涡30s混匀。加入4mL乙酸乙酯，漩涡3min，于4000r·min-1离心10min。吸取有机层至另一干净离心管中，于30℃水浴中以氮气流吹至近干。残渣以200?L流动相复溶，于16000r·min-1离心8min，吸取上清液转移至自动进样器样品管中，进样量5L，进行LC-MS/MS分析。
　　第二部分：研究单次给药后盐酸伊伐布雷定片在健康受试者体内的药代动力学特征。将30名健康受试者随机平行分为3组，每组健康受试者各10名（男女各半），低、中、高三个剂量分别单次口服2.5mg、5.0mg、7.5mg盐酸伊伐布雷定片，采血点分别为：给药前，给药后8、15、30、45min和1、1.5、2、3、4、6、9、12、24、36、48h分别采集静脉血4mL，置肝素抗凝的试管中，离心分离出血浆置普通干燥试管中，于-20℃保存，待测。用LC-MS/MS法测定血浆中的伊伐布雷定浓度，用DAS2.0软件计算药动学参数。
　　第三部分：研究多次给药后盐酸伊伐布雷定片在健康受试者体内的药代动力学特征。多次给药试验在单次给药试验结束后进行，单次给药的低、中、高三个剂量组继续给药，每次给药量为2.5mg、5.0mg、7.5mg，每日2次，连续给药7天。多次给药的采血点为：第4～7天早上给药前，第7天给药后8、15、30、45min和1、1.5、2、3、4、6、9、12、24、36、48h静脉血4mL，置于肝素化的试管中，离心分离血浆置-20℃储藏，待测。用LC-MS/MS法测定血浆中的盐酸伊伐布雷定浓度，用DAS2.0软件计算药动学参数。
　　结果：
　　1.本试验建立的人血浆中伊伐布雷定测定方法特异性好、灵敏度高、重复性强、准确性好；伊伐布雷定标准曲线线性范围为0.101-101ng·mL-1，线性关系良好；最低检测限为0.101ng·mL-1；高、中、低三种浓度的批内和批间精密度RSD均小于15.0％；样品和内标提取回收率都在70％以上；介质效应测定结果；稳定性考察等均符合生物样品测定要求。去甲伊伐布雷定标准曲线线性范围为0.085-25.5ng·mL-1，线性关系良好；最低检测限为0.085ng·mL-1；高、中、低三种浓度的批内和批间精密度RSD均小于15.0％；样品和内标提取回收率都在70％以上；介质效应测定结果；稳定性考察等均符合生物样品测定要求。
　　2.30名健康受试者单次给予盐酸伊伐布雷定片（2.5mg、5.0mg、7.5mg）后，其体内伊伐布雷定药代动力学参数分别为：Tmax：0.85±0.43h、1.15±0.24h、1.00±0.46h；Cmax：14.92±4.05ng·mL-1、35.98±8.68ng·mL-1、48.62±9.62ng·mL-1；t1/2：3.87±1.30h、5.03±1.19h、5.00±1.84h；AUC0-t：64.23±13.87ng·mL-1、169.60±33.09ng·mL-1、215.92±57.21ng·mL-1；AUC0-∞：64.88±13.97ng·mL-1、171.19±33.45ng·mL-1、217.95±56.42ng·mL-1；CLZ/F：0.04±0.01、0.03±0.01L?h-1、0.04±0.01L?h-1；VZ/F：0.23±0.09L、0.21±0.03L、0.26±0.10L。去甲伊伐布雷定药代动力学参数分别为：Tmax：1.08±0.75h、1.30±0.26h、1.13±0.48h；Cmax：1.81±0.73ng·mL-1、3.11±1.61ng·mL-1、6.26±1.02ng·mL-1；t1/2：8.15±3.09h、9.64±1.32h、10.78±2.67h；AUC0-t：13.28±3.26ng·mL-1、23.33±9.17ng·mL-1、43.94±9.22ng·mL-1；AUC0-∞：15.04±3.09ng·mL-1、25.39±9.49ng·mL-1、46.87±10.05ng·mL-1；CLZ/F：0.17±0.04L?h-1、0.24±0.13L?h-1、0.17±0.03L?h-1；Vz/F：2.11±1.31L、3.22±1.54L、2.50±0.38L。
　　3.30名健康受试者多次给予盐酸伊伐布雷定片（2.5mg、5.0mg、7.5mg）后，伊伐布雷定的药代动力学参数为：Tmax：0.85±0.44h、1.08±0.53h、1.05±1.05h；Cmax：18.32±3.27ng·mL-1、37.88±10.56ng·mL-1、50.01±17.46ng·mL-1；t1/2：4.55±1.62h、6.68±2.05h、7.15±1.90h；AUC(0-48)：93.40±22.86ng·mL-1、209.89±71.26ng·mL-1、326.49±135.05ng·mL-1；AUCss：79.78±16.87ng·mL-1、165.61±50.30ng·mL-1、243.61±87.08ng·mL-1；CL/F：0.03±0.01L?h-1、0.03±0.01L?h-1、0.03±0.01L?h-1；Vd/F：0.18±0.06L、0.25±0.09L、0.27±0.15L。多次给药后去甲伊伐布雷定的药代动力学参数为：Tmax：0.83±0.47h、1.23±0.80h、1.30±1.43h；Cmax：2.60±0.83ng·mL-1、4.94±1.76ng·mL-1、7.59±1.79ng·mL-1；t1/2：11.47±2.83h、14.25±2.44h、13.79±3.23h；AUC(0-48)：30.15±9.77ng·mL-1、58.05±19.92ng·mL-1、102.19±20.72ng·mL-1；AUCss：17.51±5.11ng·mL-1、30.54±10.21ng·mL-1、52.83±12.94ng·mL-1；CL/F：0.09±0.05L?h-1、0.09±0.05L?h-1、0.07±0.01L?h-1；Vd/F：1.33±0.30L、1.83±0.76L、1.37±0.34L；低中高三个剂量组的蓄积因子分别为：1.44±0.22，1.21±0.37，1.51±0.59。
　　结论：
　　1.本实验建立的人血浆中伊伐布雷定和去甲伊伐布雷定LC-MS/MS检测方法精密度高，准确性好，选择性强，重现性良好，适用于人血浆中伊伐布雷定和去甲伊伐布雷定的药代动力学研究。
　　2.单次给药低、中、高三个剂量组血浆中伊伐布雷定和去甲伊伐布雷定Cmax和AUC0-t与给药剂量呈线性相关，表明伊伐布雷定片在2.5-7.5mg内呈线性药代动力学特征。
　　3.多次给药伊伐布雷定达稳态后，其药动学参数Tmax、t1/2与单次给药的药代动力学参数基本一致，伊伐布雷定和去甲伊伐布雷定在体内无蓄积。此给药剂量下盐酸伊伐布雷定片有良好的安全性。

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封面

声明

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缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

稳定性心绞痛治疗药物的研究进展

1． 稳定性心绞痛的定义及发病机理

2．治疗稳定性心绞痛药物的分类[8-9]

伊伐布雷定的研究进展

3． 药理学研究

5． 药物相互作用[114]

6． 不良反应

正文

第一部分 LC-MS/MS 法测定血浆中伊伐布雷定的方法学研究

1 材料与方法

2 分析法方法验证及结果

3 讨论

第二部分 盐酸伊伐布雷定片单次给药药代动力学研究

1 对象和方法

2 结果

3. 结果分析与讨论

第三部分 盐酸伊伐布雷定片多次给药药代动力学研究

1 对象和方法

2 结果

3. 结果分析与讨论

小结

参考文献

附录

个人简历和研究成果

致谢