ndrg2两亚型重组腺病毒抑制人脑胶质瘤的体内药效学研究及左乙拉西坦添加治疗难治性癫痫的疗效和安全性分析

摘要

第一部分：ndrg2两亚型重组腺病毒抑制人脑胶质瘤的体内药效学研究
　　癌症是人类的第一位致死性疾病。开发抗癌的基因及多肽药物是本世纪的重任。脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，目前的主要治疗措施是手术切除，但术后5年存活率很低，对放疗和化疗都不很敏感，因此，急需开发治疗胶质瘤的生物药物。
　　人ndrg2基因是邓艳春等利用基于PCR的消减杂交技术进行胶质瘤和正常脑组织的差异表达基因研究时发现的。该基因全长为2024bp，含有16个外显子和15个内含子，有两个亚型，即ndrg2L和ndrg2S，分别编码371个氨基酸和357个氨基酸。在成人正常组织中，ndrg2表达最多的是唾液腺，神经组织和骨骼肌。而在胸腺，甲状腺，骨髓，睾丸和外周血白细胞中却几乎没有表达。这种表达模式提示ndrg2表达水平与细胞增殖密切相关。在肿瘤组织如脑胶质瘤、肺癌、胃癌、结肠癌、白血病等低表达或不表达，在已检测的92％(23/25)的肿瘤细胞系中不表达和50％的肿瘤组织中低表达。体外研究发现，ndrg2对脑胶质瘤细胞系，肺癌细胞系和胃癌细胞系等20余种细胞系均有生长抑制作用。
　　我们课题组前期的实验研究已经成功的构建了ndrg2两个变异体的腺病毒重组体pAd-CMV/V5-DEST-ndrg2L和pAd-CMV/V5-DEST-ndrg2S,并在体外实验中初步证实了其抑制胶质瘤的效应。为了探知ndrg2重组腺病毒是否具有体内抗肿瘤效应，如有作用，其有效剂量多大，ndrg2长短两种亚型抗肿瘤作用有无差异，我们进行了初步的ndrg2重组腺病毒体内药效学实验研究。
　　本实验首先扩增纯化了腺病毒重组体pAd-CMV/V5-DEST-ndrg2L和pAd-CMV/V5-DEST-ndrg2S，经westernblot检验，经过重组腺病毒感染的293细胞能正确表达ndrg2蛋白，用TCID50法测定其病毒滴度为5×109IU/ml。
　　建立裸鼠皮下移植人脑胶质瘤模型，待肿瘤长至5mm左右时瘤内注射ndrg2重组腺病毒，观察肿瘤生长，测量肿瘤长短径，描绘肿瘤生长曲线。结果表明：与对照组相比，ndrg2两亚型重组腺病毒组对肿瘤生长有一定程度的抑制作用，但不显著，两亚型腺病毒组之间的肿瘤生长无显著差异。在ndrg2S多种剂量的抑瘤试验中，高剂量组（2×109IU/ml）较中剂量（2×108IU/ml）和低剂量组（2×107IU/ml）的抑瘤效果明显。
　　第二部分：左乙拉西坦添加治疗难治性癫痫的疗效和安全性分析
　　癫痫（epilepsy)是一组由已知或未知病因所引起，脑部神经元高度同步化，且常具自限性的异常放电所导致，以反复发作性、短暂性、通常为刻板性的中枢神经系统功能失常为特征的综合征。抗癫痫药物（antiepilepticdrugs，AEDs)的使用是目前治疗癫痫的重要方法，常用一线抗癫痫药可使大部分患者的发作得到满意控制，但仍有20％-30％患者，发展成难治性癫痫。难治性癫痫的治疗目前仍是临床上并未完全解决的问题，许多有关难治性癫痫的治疗措施都在探索中。抗癫痫药物的使用仍是目前治疗难治性癫痫的重要方法，由于难治性癫痫对大多数抗癫痫药物耐药，因而合理的多药治疗及新抗癫痫药的应用就成了难治性癫痫药物治疗的主要方法。
　　左乙拉西坦（LEV）是一种新型抗癫痫药物，美国与欧洲已应用多年，我国于2007年上市。与传统抗癫痫药物作用于离子通道或兴奋-抑制性神经递质系统不同，其抗癫痫机制可能是通过与脑内突触囊泡蛋白SV2A结合而发挥作用。国外的研究表明，LEV是一种安全有效的治疗难治性癫痫的药物。由于在国内的上市时间较晚，其疗效和安全性仍需进一步评估，因此，我们采用回顾性分析的方法研究了LEV治疗难治性癫痫的疗效和安全性，为今后的用药提供依据。
　　我们回顾性分析了35例LEV添加治疗的难治性癫痫患者，随访3月-18月，以观察其疗效及不良反应。结果表明，LEV添加治疗难治性癫痫总有效率为48.5％，对部分性发作和全面性发作的疗效无显著差异，对儿童和成人的疗效无显著差异，12个月的保留率为42.8％，不良反应发生率为31.5％，无严重不良反应。

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缩略语表

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前 言

文献回顾

第一部分：ndrg2 与胶质瘤的基因治疗

1. 胶质瘤与基因治疗

2. ndrg2的研究进展

3. 腺病毒载体与基因治疗

第二部分：左乙拉西坦与难治性癫痫

4 难治性癫痫

5 左乙拉西坦

6 左乙拉西坦治疗难治性癫痫的作用

正 文

第一部分 ndrg2两亚型重组腺病毒抑制人脑胶质瘤的体内药效学研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 左乙拉西坦添加治疗难治性癫痫的疗效和安全性分析

1 资料与方法

2 结果

3 讨论

小 结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢