TLR4在特发性炎症性肌病中的作用研究

摘要

特发性炎症性肌病（IIM）是一组获得性自身免疫性肌肉机能障碍疾病，故又称自身免疫性肌炎。包括多发性肌炎、皮肌炎、包涵体肌炎、非特异性肌炎和免疫介导的坏死性肌炎5种亚型。其共同的临床表现多有轻度到重度的肌肉无力、肌内膜炎性细胞浸润、肌酸激酶升高、肌电图异常等。目前临床治疗IIM的药物副作用大，效果有限，需要疗效更好的治疗药物的研发，那么特发性肌炎机制的研究显得更为必要和重要。
　　Toll样受体4（TLR4）是Toll蛋白样受体家族中最重要的成员之一，通过识别抗原相关分子模式（PAMPs）引起有效的免疫反应而参与多种炎性、自身免疫性疾病的发生。TLR4主要激活两种信号途径：MyD88依赖和不依赖，前者通过激活NF-кB促进炎性因子的释放。一些研究表明TLR4在各种自身免疫性疾病中发挥重要作用，另有研究显示TLR4基因敲除小鼠可避免某些自身免疫性疾病的发生。
　　然而，TLR4在特发性肌炎中的作用至今国内外研究甚少，故本课题分别研究TLR4在实验性自身免疫性肌炎（EAM）模型小鼠中和在多发性肌炎患者肌肉活检中的表达情况，观察TLR4是否参与特发性肌炎的发生发展过程。希望通过此研究为临床有效的新药开发提供思路。
　　目的：
　　研究TLR4、MyD88、NF-κB在实验性自身免疫性肌炎小鼠（EAM）和多发性肌炎患者肌肉活检中的表达情况，探讨TLR4在特发性肌炎发病中的可能作用。
　　方法：
　　实验一：将30只雌性BALB/c小鼠随机分为5组（n=6）：第1组为正常对照组，其它4组分别为肌炎模型1、2、3、4周处理组，后4组均应用肌球蛋白诱导实验性自身免疫性肌炎模型（EAM）。采用免疫组织化学方法检测各组小鼠肌肉中TLR4的表达情况。采用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠肌肉、淋巴结及脾脏中TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表达水平。
　　实验二：将西京医院神经内科2009.4～2011.5收集的根据ENMC诊断标准确诊为多发性肌炎的17例患者肌肉活检标本作为PM组（n=17），7例非特发性肌炎表现且组织学正常的患者肌肉活检标本作为对照组（n=7）。采用免疫组织化学方法检测各组TLR4的表达情况。采用实时荧光定量PCR方法检测各组TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表达水平。
　　结果：
　　实验一：（1）与正常小鼠相比，EAM1-4周各组小鼠肌肉中TLR4表达均不同程度上调（P<0.01）。（2）与正常小鼠相比，肌炎各组小鼠肌肉及淋巴结中TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表达均有不同程度上调（P<0.01），其中2周组升高最为显著（P<0.01）。（3）各组肌肉及淋巴结中TLR4mRNA表达水平与MyD88mRNA、NF-κBmRNA表达水平均呈正相关(P<0.01)，MyD88mRNA表达水平与NF-κBmRNA表达水平呈正相关(P<0.01)。（4）EAM各组小鼠脾脏TLR4mRNA的表达均低于正常对照组（P<0.01）；2周组脾脏中MyD88mRNA、NF-κBmRNA的表达水平均明显低于正常对照组（P<0.01）；MyD88mRNA与NF-κBmRNA呈现正相关（P<0.01）。
　　实验二：（1）免疫组化结果显示：PM肌肉活检标本中TLR4表达较正常对照组上调，有统计学差异（P<0.01）。（2）RT-PCR结果显示：PM肌肉活检标本中TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表达较正常对照组上调，有统计学差异（P<0.01）。（3）TLR4mRNA表达水平与MyD88mRNA、NF-κBmRNA表达水平均呈正相关(P<0.01)，MyD88mRNA表达水平与NF-κBmRNA表达水平呈正相关(P<0.01)。
　　结论：
　　（1）TLR4在特发性肌炎肌肉及淋巴结中高表达，且与炎症程度正相关。
　　（2）本课题两部分实验结果均提示：TLR4参与特发性肌炎的发生发展。
　　（3）TLR4可能通过MyD88依赖型信号途径在特发性肌炎中发挥作用，并通过激活NF-κB促进炎性因子释放。

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缩略语表

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前言

文 献 回 顾

一、 特发性炎症性肌病概述

二、 TLR4 的概述

正文

实验一 TLR4 在实验性自身免疫性肌炎小鼠中的作用研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 TLR4 在多发性肌炎中的作用研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

附录

个人简历和研究成果

致谢