BMP-2、bFGF和Dex联合应用对犬牙周膜细胞成骨分化能力的影响

摘要

牙周膜细胞（PDLCs）被广泛应用于牙周再生领域。体外培养的PDLCs可以在诱导因子的调控下向成骨、成牙骨质等方向分化[1]。以往研究多集中于不同细胞因子对PDLCs生物学行为的不同影响，且往往局限于单一细胞因子对其作用的研究，多种诱导因子联合应用于PDLCs，其生物学特性的变化尚无详细报道。本研究通过联合应用BMP-2、bFGF和Dex三种因子诱导PDLCs，观察细胞增殖，成骨、成脂分化以及部分成骨因子的表达，为BMP-2、bFGF和Dex促进牙周组织的再生提供理论依据。
　　目的：联合应用BMP-2、bFGF和Dex诱导PDLCs，观察其生物学特性的变化。
　　方法：体外培养犬PDLCs，将第4代PDLCs分为5组：（1）对照组（未添加诱导因子）；（2）加入200μg/LBMP-2+10μg/LbFGF组；（3）加入200μg/LBMP-2+10ˉ8mol/LDex组；（4）加入10μg/LbFGF+10ˉ8mol/LDex组；（5）加入10μg/LbFGF+200μg/LBMP-2+10ˉ8mol/LDex组。MTT法观察BMP-2、bFGF和Dex联合应用对犬PDLCs增殖的影响；成脂、成骨分化实验以及ALP的检测观察BMP-2、bFGF、Dex联合应用对犬PDLCs分化的影响；RT-PCR和免疫荧光法检测BMP-2、bFGF、Dex联合应用PDLCs中OPN、COL-I、BSP的表达。
　　结果：
　　1、PDLCs细胞呈典型的成纤维细胞样形态：长梭形、纺锤形、三角形等多形性。波形丝蛋白表达阳性，角蛋白表达阴性。
　　2、MTT增殖实验显示：bFGF+Dex、BMP-2+bFGF、BMP-2+Dex、bFGF+BMP-2+Dex组均促进犬PDLCs增殖，但各诱导组间无明显差异。
　　3、成脂、成骨诱导实验以及ALP检测结果：bFGF+Dex、BMP-2+bFGF、BMP-2+Dex、bFGF+BMP-2+Dex组成脂诱导14d后，油红O染色，各组细胞诱导后观察到阳性脂肪小滴染色。成骨诱导31d后，bFGF+BMP-2+Dex组矿化结节染色深、面积较大、细胞密集而集中；经bFGF+Dex、BMP-2+bFGF、BMP-2+Dex、bFGF+BMP-2+Dex组因子诱导后的犬PDLCs的ALP活性均高于对照组，各组间ALP活性与对照组相比均有显著提高(p<0.05)，bFGF+BMP-2+Dex组ALP活性最强。
　　4、RT-PCR结果显示bFGF+BMP-2+Dex组PDLCs中OPN、COL-I基因表达最为显著；免疫荧光染色检测BSP显示同样的结果，PDLCs中bFGF+BMP-2+Dex组同时作用BSP的基因表达最显著。
　　结论：联合应用BMP-2、bFGF和Dex可以促进犬PDLCs增殖和分化的能力，增加COL-I、OPN、BSP成骨基因的表达。

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前言

文献回顾

牙周组织再生的研究进展

一、种子细胞

二、生长因子

正文

BMP-2、bFGF 和 Dex 联合应用对犬牙周膜细胞成骨分化能力的影响

1 材料与试剂

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

附录

个人简历及研究成果

致谢

正畸治疗临床病例报告