金针菇菇根中天然寡糖提取、纯化及生物学活性研究

摘要

金针菇（Flammulina velutipes）是我国食用菌的主要栽培品种之一，营养丰富，含有多种生物活性，在抗肿瘤、免疫调节及抗过敏作用、抗病毒、降低胆固醇、保护肝脏细胞、抗疲劳、增强记忆力等方面效果明显。近几年来，随着反季节周年化生产技术和工厂化生产技术的日趋成熟，金针菇的栽培规模正逐年增加。随之而来的问题就是如何更高效的利用金针菇生产过程中产生的下脚料。本文以金针菇菇根为原料提取和纯化天然寡糖，并对其生物活性进行了研究。 原材料经预处理后通过乙醇梯度沉淀试验确定寡糖的分布范围，结果最适的乙醇沉淀浓度为80％，上清液冻干即为金针菇菇根粗寡糖。 通过单因素变化法确定水提醇沉去多糖提取金针菇菇根粗寡糖的工艺:提取温度70℃、料液比1∶12、提取时间1.5h、提取2次。金针菇菇根粗寡糖得率约为10％，深褐色，有金针菇特有香味，溶于乙醇，易溶于水，易吸潮结块。 通过筛选和对比，确定金针菇菇根粗寡糖脱色材料为大孔吸附树脂D101，脱色效果好、再生能力强、样品损耗小。初步建立静态、动态脱色工艺，静态脱色工艺:样品浓度25mg/mL、料液比1∶4、60℃下脱色时间8h，脱色率可达85.22％;动态脱色工艺:样品浓度25mg/mL、料液比1∶4、转速120rpm、60℃下脱色时间3h，脱色率可达88.76％。 通过DEAE Sepharose F.F.离子交换柱层析，明确了金针菇菇根粗寡糖组分多为中性寡糖，有少量带阴离子的寡糖，通过凝胶SephadexG-25层析发现，金针菇菇根粗寡糖主要由四种组分组成。 通过抑菌试验研究金针菇菇根粗寡糖对8种植物病原真菌和1种鸡腿蘑病原真菌的抑制作用。结果表明，供试浓度范围内，浓度越高抑菌效果越好。当粗寡糖浓度为100mg/mL时，对所有供试菌株均表现出较强的抑制生长现象，其中对鸡腿蘑黑头病菌和茄子褐纹病菌的抑制效果最明显，抑制率分别达到83.35％和82.93％。 通过培养原料中添加金针菇菇根粗寡糖研究其对糙皮侧耳和金针菇菌丝生长及产量的影响。在试验浓度范围内，添加量越多原种满瓶时间越短，当金针菇菇根粗寡糖添加量为50 mg/g时，糙皮侧耳和金针菇原种满瓶时间较对照分别提前5d和4d。出菇试验发现，添加金针菇菇根粗寡糖可以提高糙皮侧耳和金针菇头潮菇的产量，金针菇菇根粗寡糖添加浓度为10mg/g时，糙皮侧耳和金针菇的产量分别比对照提高9.93％和10.23％。 鸡腿蘑出菇袋发满菌后，以覆土前喷施金针菇菇根粗寡糖液和覆土中拌施粗寡糖液两种方式处理，结果均能提高鸡腿蘑的产量，其中覆土中拌施粗寡糖液处理的鸡腿蘑产量比对照提高28.42％。 PDA液体培养基中添加金针菇菇根粗寡糖可以促进食药用菌菌丝体的生长，其中对灰树花菌丝体生长的促进效果最好，菌丝体的生物量提高114.42％，其次是金针菇，菌丝体生物量较对照增加62.32％。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 金针菇的研究概况

1．1．1 金针菇栽培现状

1．1．2 金针菇营养价值

1．1．3 金针菇活性物质研究

1．1．4 金针菇产品的研发现状

1．2 天然寡糖的研究进展

1．2．1 寡糖的分布

1．2．2 寡糖的分类

1．2．3 天然寡糖的提取方法

1．2．4 寡糖的脱色

1．2．5 寡糖的分离

1．2．6 寡糖的应用

1．3 本研究的目的和意义

第二章 金针菇菇根寡糖的提取工艺研究

2．1 材料与仪器

2．1．1 供试材料

2．1．2 试剂

2．1．3 仪器

2．2 方法

2．2．1 材料预处理

2．2．2 金针菇菇根提取物的制备

2．2．3 提取物中还原糖含量测定

2．2．4 提取物中总糖含量测定

2．2．5 金针菇菇根粗寡糖提取工艺的研究

2．3 结果与分析

2．3．1 金针菇菇根提取物中还原糖含量分布

2．3．2 料液比的选择

2．3．3 提取温度的选择

2．3．4 提取时间的选择

2．4 小结与讨论

第三章 金针菇菇根粗寡糖脱色及分离工艺研究

3．1 材料与仪器

3．1．1 材料

3．1．2 试剂

3．1．3 仪器

3．2 方法

3．2．1 树脂的预处理

3．2．2 金针菇菇根粗寡糖液色素最大波长的测定

3．2．3 树脂筛选

3．2．4 金针菇菇根粗寡糖静态脱色工艺的研究

3．2．5 金针菇菇根粗寡糖动态脱色工艺的研究

3．2．6 金针菇菇根粗寡糖的离子交换层析

3．2．7 金针菇菇根粗寡糖的凝胶过滤层析

3．3 结果与分析

3．3．1 最大吸收波长的确定

3．3．2 树脂筛选结果

3．3．3 粗寡糖液脱色浓度确定

3．3．4 料液比对脱色效果的影响

3．3．5 脱色温度对脱色效果的影响

3．3．6 脱色时间对脱色效果的影响

3．3．7 转速对动态脱色效果的影响

3．3．8 脱色时间对动态脱色的影响

3．3．9 金针菇菇根粗寡糖离子交换层析结果

3．3．10 水相FVO-W的凝胶过滤层析

3．4 小结与讨论

第四章 金针菇菇根粗寡糖对植物病原菌真菌生长的影响

4．1 材料与方法

4．1．1 供试材料

4．1．2 仪器

4．1．3 培养基的制备

4．1．4 菌种的活化

4．1．5 金针菇菇根粗寡糖对植物病原真菌菌丝生长的影响

4．2 结果与分析

4．2．1 金针菇粗寡糖对植物病原真菌的抑制作用

4．3 小结与讨论

第五章 金针菇菇根粗寡糖在食药用菌生产上的应用

5．1 材料

5．1．1 供试材料

5．1．2 培养基及常用溶液

5．1．3 仪器

5．2 方法

5．2．1 供试菌株培养

5．2．2 金针菇菇根粗寡糖对菌丝生长和头潮菇的影响

5．2．3 金针菇菇根粗寡糖对鸡腿蘑覆土效果的影响

5．2．4 金针菇菇根粗寡糖对鸡腿蘑黑斑病的抑制作用

5．2．5 金针菇菇根粗寡糖对灰树花、金针菇和灵芝液体培养的影响

5．3 结果及分析

5．3．1 金针菇菇根粗寡糖对糙皮侧耳和金针菇菌丝生长的影响

5．3．2 金针菇菇根粗寡糖对糙皮侧耳和金针菇头潮菇的影响

5．3．3 金针菇菇根粗寡糖对鸡腿蘑头潮菇的影响

5．3．4 金针菇菇根粗寡糖对鸡腿蘑轮枝孢霉的抑制作用

5．3．5 金针菇菇根粗寡糖对灰树花、金针菇和灵芝液体培养的影响

5．4 小结与讨论

第六章 全文总结

参考文献

致谢

论文发表情况