苦龙胆酯苷在大鼠体内的药代动力学研究

摘要

目的：
　　苦龙胆酯苷是一种裂环烯醚萜苷类化合物，又称为苦龙苷或龙胆苦酯苷（Amarogentin，AG）。目前，已证明可从川东獐牙菜、印度獐牙菜、龙胆草以及辐花肋柱花中提取。AG具有助消化，保肝，抗皮肤肿瘤，抗黑热病等药理活性。本研究的目的在于揭示 AG的药代动力学特点和组织分布，为其药理、毒理学以及临床合理应用提供理论依据。
　　方法：
　　（1）高效液相色谱法（HPLC）检测条件：色谱柱为Woburn Stamsil C18，流动相是甲醇-水（40:60，v/v），流速为1.0 mL?min-1，柱温为30℃，内标为胡黄连苷-?，检测波长为260 nm。（2）大鼠药代动力学：采用40％PEG400生理盐水将 AG完全溶解，按6.25mg·kg-1、12.5mg·kg-1和25 mg·kg-1的剂量给 SD大鼠尾静脉注射，于给药后2、5、10、15、30、45、60、90、120和150 min，通过眼底静脉丛取血约0.5 mL，置于1.5 mL EDTA抗凝管，4000 r?min-1离心15 min，移取血浆，-20℃保存备用；液-液萃取处理血液样品，以此方法取得空白血浆；取200μL血浆，加入内标溶液（114μg?mL-1，胡黄连苷-?）15μL，混匀，加入乙酸乙酯1 mL，涡旋混匀3 min，4000 r?min-1离心10 min，提取2次，合并提取液，用40℃N2吹干，残留物加入200μL流动相溶解，涡旋混合，12000 r?min-1离心10 min后，取20μL进行HPLC分析，检测血浆样品中AG含量。（3）AG的组织分布：24只大鼠随机均分为3组，每组8只，单次静脉给药25 mg·kg-1，给药后分别于10 min、30 min和90 min将动物断颈处死，取心、肝、脾、肺和肾脏，在生理盐水中冲洗，滤纸试干，称质量后，各组织按1 g:3 mL的质量体积比加入生理盐水，于组织匀浆器上制成匀浆（冰浴），12000 r?min-1离心10 min，移取上清液，-20℃保存备用；按照 HPLC方法等进行检测。（4）统计处理：应用药代动力学软件 DAS2.0拟合房室模型和IBM SPSS Statistics20.0处理数据和分析药代动力学参数等。
　　结果：
　　（1）建立AG HPLC检测标准曲线：以苦龙胆酯苷的峰面积与内标物胡黄连苷?的峰面积比作为纵坐标，血浆苦龙胆酯苷浓度作为横坐标作图，得血浆中苦龙胆酯苷的标准曲线回归方程为y=0.141x－0.0202，r2=0.9989，n=5，线性范围为0.114～114μg?mL-1，定量下限为0.114μg?mL-1，日内和日间精密度 RSD均小于10%，提取回收率为101.07%～106.18%，稳定性的RSD均小于3%。（2）AG药代动力学特征：AG单次静脉给药后，体内药代动力学过程符合二室模型；给药后，血药浓度迅速达到最大值，6.25 mg·kg-1、12.5 mg·kg-1和25 mg·kg-13个剂量下的最大血药浓度Cmax分别约为18 mg?L-1、27 mg?L-1和48 mg?L-1；曲线下面积AUC0-t分别是200 mg?min?L-1、357 mg?min?L-1和535 mg?min?L-1；药物半衰期在41～57 min；血浆清除率 CLz为0.030L?(min?kg)-1、0.034L?(min?kg)-1和0.045L?(min?kg)-1；同一剂量组内、同一时间点的各组数据之间差异不大，所有重要参数的 RSD均小于20%。药代动力学参数的数理分析结果表明，在实验剂量范围内，AG最大血药浓度（Cmax）或进入体循环的药量（用 AUC表示）的变化与给药剂量的改变不成正比。（3）AG的组织分布特征：以 AG的峰面积与内标物胡黄连苷?的峰面积比作为纵坐标，组织样品 AG浓度作为横坐标作图；各组织样品的标准曲线分别是心脏y=0.1508x＋0.0127，r2=0.9999，线性范围为0.114～22.8μg?mL-1；肝脏y=0.2068x－0.2190，r2=0.9979，线性范围为0.114～114μg?mL-1；脾脏y=0.1243x＋0.0157，r2=0.9996，线性范围为0.114～22.8μg?mL-1；肺脏y=0.1294x＋0.0200，r2=0.9978，线性范围为0.114～22.8μg?mL-1；肾脏y=0.1263x＋0.0575，r2=0.9994，线性范围为0.228～57μg?mL-1。定量下限为0.114μg?mL-1。日内和日间精密度RSD均小于15%，提取回收率为83.67%～125.90%，稳定性的RSD均小于15%；AG在心、肝、脾、肺、肾等脏器中均有分布，其中肝脏中分布最多，其次是肾脏，在心、脾、肺中分布很少。
　　结论：
　　（1）建立了血浆和主要脏器组织中HPLC检测AG的方法：该方法符合药代动力学和组织分布研究的要求，具有前处理简单、回收率高，分析结果准确、灵敏、重现性好等特点。（2）首次证实AG的药代动力学特征：单次静脉给予AG后，进入大鼠体循环的 AG药量与给药剂量不成正比，提示 AG在体内的药代动力学行为具有非线性特征。（3）证实 AG在体内重要脏器组织分布特征：AG在大鼠心、肝、脾、肺、肾等主要脏器组织中均有分布，但消除迅速；其中肝组织的 AG浓度最高，这可能与肝组织血流量丰富有关；其次是肾脏，提示药物经肾排泄的量较高。

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缩略语表

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文献回顾

1 来源

2 药效学研究

3 药代动力学研究

4 剂型研究

5 结论

实验一 AG大鼠血浆药代动力学研究

1 实验材料与仪器

2 试验方法

3 结果

4 讨论

实验二 AG大鼠组织分布研究

1 实验材料与仪器

2 试验方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢