内质网应激在去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ减轻心肌微血管内皮细胞缺血/再灌注损伤中的作用

摘要

目的：
　　心肌缺血/再灌注损伤（ischemia reperfusion injury，I/RI）可加重急性心肌梗死患者心脏的损伤。缺血/再灌注损伤发生时，缺氧、钙超载、自由基增多等多种因素，可诱发内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS)。以往研究证实内质网应激是心肌缺血/再灌注损伤的重要机制之一，抑制过度的内质网应激可减轻心肌的损伤，被认为是一种潜在的治疗靶点。
　　去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ（des-aspartate-angiotensinⅠ，DAA-Ⅰ）是一种有生物学活性的内源性肽，可对抗血管紧张素Ⅱ的病理生理学作用，通过抑制炎症反应，可减轻心肌的缺血/再灌注损伤。我们前期研究证实，DA A-Ⅰ对缺血/再灌注过程中的心肌微血管内皮细胞有保护作用，内质网应激参与其中，但其具体分子机制尚不清楚。本研究将对其可能的分子机制进行探讨，为其临床应用实验室依据。
　　方法：
　　1.分离和培养大鼠的心肌微血管内皮细胞，建立模拟缺血/再灌注损伤的细胞模型。进行随机化分组，实验分为对照组、模拟缺血/再灌注损伤组（SI/R组）、模拟缺血/再灌注损伤+4-苯基丁酸钠（4-PBA，内质网应激抑制剂）组、模拟缺血/再灌注损伤+ DAA-I组、模拟缺血/再灌注损伤+ DAA-I+Compound C（AMPK特异性抑制剂）组。
　　2.用MTT法检测细胞增值能力，用TUNEL法检测细胞凋亡。
　　3.采用Western blot法检测GRP78、CHOP、AMPK蛋白表达和磷酸化水平。
　　结果：
　　1.成功地进行了心肌微血管内皮细胞的分离及培养，并建立起模拟缺血/再灌注损伤的细胞模型。
　　2.模拟缺血/再灌注损伤对细胞增殖能力和凋亡的影响。SI/R组的细胞增值能力比对照组的明显下降（P<0.05），细胞凋亡率明显增加（4.02％±0.85%比26.21%±2.97%，P<0.05）。与SI/R组比较，SI/R+4-PBA组 CMECs细胞增值能力明显升高（P<0.05），SI/R+DAA-I组CMECs凋亡率明显降低（26.21%±2.97%比16.18%±2.93%，P<0.05），而SI/R+DAA-I+Compound C组CMECs凋亡率略微降低，但仍具有统计学意义（26.21%±2.97%比21.68%±3.37%，P>0.05）。
　　3.模拟缺血/再灌注损伤对GRP78、CHOP、AMPK蛋白表达和磷酸化水平的影响。SI/R组GRP78、CHOP蛋白表达比对照组明显升高（P<0.05），p-AMPK稍升高。与SI/R组比较，SI/R+4-PBA组 GRP78、CHOP蛋白表达明显降低（P<0.05）；SI/R+ DAA-I组GRP78、CHOP蛋白表达明显降低（P<0.05），p-AMPK明显升高（P<0.05）；SI/R+DAA-I+Compound C组GRP78、CHOP蛋白表达轻度降低（P<0.05），p-AMPK水平升高（P<0.05），但低于SI/R+DAA-I组（P<0.05）。
　　结论：
　　内质网应激参与大鼠心肌微血管内皮细胞的缺血/再灌注损伤，去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ可显著抑制CMECs缺血/再灌注损伤过程中的内质网应激，其分子机制可能与激活AMPK途径相关。

目录

封面

声明

目录

缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

一 心肌缺血/再灌注损伤

二 内质网应激在心肌缺血/再灌注损伤中的作用

三 心肌微血管内皮细胞

四 去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ与心肌缺血/再灌注损伤

第一部分 细胞培养及建立模拟缺血/再灌注模型

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 内质网应激对CMECs的缺血/再灌注损伤的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第三部分 内质网应激在DAA-I减轻SI/R诱导的CMECs损伤中的作用

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

附录

个人简历和研究成果

致谢