慢性肾脏病患者血清Bmi-1水平与疾病进展的关系

摘要

研究背景：
　　慢性肾脏病（chronic kidney diseases，CKD）已经成为一个全球性的公共健康问题，这与其较高的发病率、死亡率及较低的生活质量有关。CKD往往起病隐匿，症状不典型，容易被忽略。临床实践中，CKD危险因素（如高血压、糖尿病等）、肾功指标（如蛋白尿、血肌酐、胱抑素C等）是常用的评估CKD进展及反映疾病严重性的指标，然而这些指标并不能早期反映疾病的进展，仅仅依赖这些指标可能会导致早期肾保护干预措施的延误。因此，积极寻找早期、无创、灵敏的血清生物学指标对CKD进展的监测以及早期干预有着极其重要的作用。
　　B细胞特异单克隆鼠白血病毒整合位点基因(B lymphoma Mo-MLV insertion region1，Bmi-l)是多梳基因(PcG)家族中重要的调控基因，参与调控细胞的增殖与分化，在维持正常干细胞的自我更新及多向分化的过程中起着重要作用。在人体多种恶性肿瘤中，Bmi-1的表达水平是上调的，其在恶性肿瘤患者血清或血浆中的浓度也可以作为肿瘤存在状态、分期及预后的一个生物学标志物。我们之前的研究在细胞水平和动物模型中首次证实了Bmi-1参与缺氧诱导的肾小管上皮-间质的转分化及肾脏纤维化的发展。在 CKD患者肾脏组织中 Bmi-1的表达上调，同时伴随有 HIF1α及Twist表达增加。然而Bmi-1在CKD患者循环中的水平及其与CKD进展的关系并不清楚。本研究着重探讨了CKD患者血清中Bmi-1的表达水平及其是否可以作为判断CKD进展及预后的血清生物学指标。
　　研究目的：
　　1.观察CKD患者血清中Bmi-1的表达水平，分析其与健康对照组之间的差异。
　　2.分析Bmi-1的表达水平与肾脏纤维化严重程度的相关性，探讨其在预测CKD进展及预后中的价值。
　　研究方法：
　　1.本研究前瞻性收集了2010年6月-2012年1月之间在我院就诊的146例CKD患者（CKD组）和41例同期体检的健康人（正常对照组）的临床资料及血清标本。所有患者均记录基本情况（性别、年龄、身高、体重、血压）、简要病史（是否合并有恶性肿瘤病史、严重的心脑血管疾病史等）及重要的实验室检查指标（尿素氮，肌酐，胱抑素 C，24h尿蛋白定量等）。行肾活检穿刺穿刺术的患者，详细记录患者的病理报告，建立数据库。计算身高体重指数（body mass index，BMI）、用CKD-EPI公式估算肾小球滤过率（estimated glomerular filtration rate，eGFR），根据K/DOQI指南进行CKD分期，完善临床数据库。
　　2.所有受试者清晨空腹采集外周静脉血3ml，置于乙二胺四乙酸抗凝试管，进行离心（4℃，3000r/min，离心20min）后取上清液，封装于1.5ml EP中，保存于-80℃冰箱待测。用酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法对所有血清标本的Bmi-1水平进行检测。
　　3. Spearman法分析CKD患者Bmi-1的表达水平与肾功能临床指标及组织学指标的相关性。Kruskal-Wallis秩和分析比较CKD不同分期Bmi-1表达水平的差异，并平均随访44个月研究血清Bmi-1与CKD患者预后的关系，Cox比例风险回归模型来评估肾脏预后的危险因素。
　　结果：
　　1. CKD组血清Bmi-1浓度为510.9（381.0-706.9）pg/ml，明显高于正常对照组264.4（237.6-334.5）pg/ml，P<0.001。
　　2. CKD各分期之间血清Bmi-1的表达水平有显著差异（P<0.01），但在各病理类型之间血清Bmi-1水平差异无统计学意义（P>0.05）。
　　3. Bmi-1表达水平与eGFR呈负相关（r=-0.382, P<0.001），与患者肌酐、尿素氮、胱抑素 C水平及肾间质纤维化的比例呈正相关（r=0.291，P<0.001；r=0.266， P<0.001；r=0.341，P<0.001；r=0.407，P<0.001）。
　　4.将CKD患者按照Bmi-1的平均值分为两组，在平均44（5-50）个月的随访期内，血清Bmi-1水平≥510.9 pg/mL组36（25％）位患者到达终点事件，而Bmi-1水平<510.9 pg/mL组8（6%）位患者到达终点事件（P<0.001）。将血清Bmi-1水平作为一个分类变量进行 Cox单变量分析，结果表明在血清 Bmi-1水平≥510.9 pg/mL组到达终点事件的风险明显高于Bmi-1水平<510.9 pg/mL组（HR=5.68；95% CI：2.64-12.24；P＜0.001）。同时我们也发现大量蛋白尿、高血压、肾间质纤维化比例和肾小球硬化硬化率与肾功能的恶化相关。Kaplan–Meier（KM）生存曲线分析表明血清Bmi-1水平≥510.9 pg/mL组肾脏存活率明显低于Bmi-1水平<510.9 pg/mL组。
　　5.在 Cox风险回归模型中调整了基线特征性别、年龄、平均动脉压后，较高水平的Bmi-1使CKD患者发生不良预后事件的风险更大（HR=5.39；95% CI：2.48-11.72；P＜0.001）。
　　结论：
　　1.与正常对照组相比，CKD患者血清Bmi-1浓度显著增高，且随着CKD的进展及肾功能的下降其表达水平进一步增高。
　　2. Bmi-1水平的升高与CKD患者肾脏的不良预后相关，表明Bmi-1可能是CKD进展及预后的一个新的血清生物学指标。

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缩略语表

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前言

文献回顾

一、慢性肾脏病（CKD）

1. CKD的定义及分期

2、CKD进展的生物学标志物

二、B细胞特异单克隆鼠白血病毒整合位点基因（Bmi-1）

1．Bmi-1基因结构及功能

2．Bmi-1基因的调控

3. Bmi-1基因与机体疾病

4. Bmi-1基因的靶向治疗

第一部分 病例采集与数据库建立

1. 采集对象

1.1 CKD组入选标准

1.2 正常对照组

2. 数据库建立

第二部分 Bmi-1的检测及其与CKD患者预后的相关研究

1. 实验材料

1.1主要仪器

1.2主要试剂

2. 实验方法

2.1标本采集：

2.2 ELISA法测定血清Bmi-1水平

2.3随访和预后

2.4统计学处理

3. 结果

3.1 CKD患者的基线资料

3.2 CKD组及健康对照组Bmi-1的表达水平

3.3 血清Bmi-1水平与CKD患者临床肾功能指标的相关性

3.4 血清Bmi-1的表达水平与CKD患者组织学参数的相关性

3.5 血清Bmi-1的浓度与CKD患者预后的关系

4. 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢