Toll样受体4表达变化对创伤性脑损伤后小鼠海马区神经干细胞增殖的影响

摘要

目的：
　　探讨利用小鼠创伤性脑损伤（traumatic brain injury, TBI）打击模型模拟创伤环境并抑制Toll样受体4（toll-like receptor4, TLR4）表达后小鼠行为学表现变化、海马齿状回部髓样分化因子88（myeloid differentiation primary response gene88, MYD88）蛋白质及信使RNA（messenger RNA, mRNA）水平表达变化，以及抑制TLR4与神经干细胞（neural stem cells, NSCs）变化的关系。
　　方法：
　　使用PCI-3000（precision cortical impactor-3000）打击装置建立小鼠TBI模型，使用TLR4抑制剂CLI-095腹腔注射抑制创伤后TLR4表达，使用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU）标记表达变化的海马区神经细胞，使用巢蛋白（nestin）标记表达变化的NSCs，采用实时定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）及行为学检测方法矿场实验，高架十字实验，Morris水迷宫（Morris water maze, MWM）实验，以及免疫荧光染色法和蛋白质印迹技术分别检测创伤72小时后小鼠行为学变化、海马区MYD88表达变化情况以及NSCs变化特征。
　　结果：
　　1．创伤模型建立并腹腔注射TLR4抑制剂对TLR4进行抑制后，72小时海马区MYD88 mRNA表达量较仅腹腔注射溶剂减少（P<0.05），但 CLI-095组及对照组MYD88 mRNA表达水平均较假手术组高（P<0.05）。矿场实验，高架十字实验，Morris水迷宫检测TBI72小时后小鼠发现其学习、记忆及情绪功能水平下降，抑制TLR4后有所好转（P<0.05），但仍低于假损伤组（P<0.05）。
　　2．腹腔注射CLI-095后MYD88蛋白表达下降，低于溶剂组，但较假手术组表达程度高（P<0.05），海马齿状回部 BrdU阳性细胞（即中枢神经系统增殖细胞）表达程度增高，低于假手术组，但仍高于溶剂组（P<0.05）。
　　3．MYD88蛋白表达在TBI后72小时增高，但TBI后6小时腹腔注射CLI-095并连续注射3天后MYD88表达下降，而CLI-095腹腔注射后BrdU以及nestin标记细胞数均较腹腔注射溶剂增多（P<0.05）。
　　结论：
　　1．TBI影响小鼠行为学水平，且MYD88的mRNA水平在抑制TLR4后下调，该结果可在考虑如何恢复创伤后小鼠神经功能上发挥一定作用，TLR4可能是神经损伤及修复的关键因素之一。
　　2．海马区MYD88的表达与NSCs变化相反，并证实抑制TLR4可能激活并引起NSCs的增殖，从而促进受损神经细胞的修复。
　　3．这个结果说明海马区包括 NSCs在内的潜在增殖细胞表达 TLR4，并且 TBI后抑制TLR4与NSCs增殖之间存在潜在联系。因此可以说海马区TLR4也许在TBI后的内源性神经再生上扮演重要角色。

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缩略语表

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前言

文献回顾

1．Toll样受体概述：

2．Toll样受体4概述：

3．Toll样受体4通路研究：

4．炎症是TBI后的主要致病因素

5．Toll样受体4在临床中的应用：

6．Toll样受体4研究意义与展望：

7．TLR4对TBI后神经损伤及修复的影响和意义

第一部分 创伤性脑损伤后Toll样受体4表达变化对小鼠海马区MYD88 mRNA的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 Toll样受体（TLR）4表达变化对创伤性脑损伤后小鼠海马区MYD88及神经细胞增殖的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第三部分 Toll样受体4表达变化对创伤性脑损伤后小鼠海马区神经干细胞增殖的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢