脂联素改善低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞功能障碍及其机制

摘要

目的:肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension，PAH)是一个受到普遍关注的全球健康问题，是一种起源于肺动脉最终影响心脏的微小血管疾病。低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary arterial hypertension，HPH）是PAH中最常见的类型之一，难治且死亡率高。因此，迫切需要阐明其发病机制，并为临床提供有效的防范措施。本研究的目的在于探索重组人球状脂联素（gAd,APN)通过促进一氧化氮（nitric oxide， NO）和抑制内皮素-1（endothelin-1，ET-1）的生成改善低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）功能障碍，并探讨其潜在的分子机制。
　　方法：取SD雄性大鼠肺微PMVECs原代培养，传至第三代行细胞鉴定；PMVECs分3组，常氧（210 ml/L O2，50ml/LCO2，740ml/L N2，37℃）组；低氧（20 ml/L O2，50ml/LCO2，930ml/L N2，37℃）组；低氧（20 ml/L O2，50ml/LCO2，930ml/L N2，37℃）+APN（1μg/ml）组处理，分别培养3h、6h、9h、12h，收集细胞上清用硝酸还原法测NO浓度；用酶联免疫吸附试验（ELISA）测细胞上清中ET-1浓度；3组PMVECs行RT-PCR测定eNOS-mRNA和ET-1-mRNA基因表达；各组12h细胞行Western Blot检测 AMPK/p-AMPK、p-85-PI3K、Akt/p-Akt、eNOS/p-eNOS、ERK1/2/p-ERK1/2蛋白水平。
　　结果：①鉴定培养细胞为PMVECs。②在相应时间点，与正常组比较，低氧组培养液上清NO浓度、细胞eNOS-mRNA基因表达水平显著下降（P＜0.01）；与低氧组对比，低氧+APN组显著增加培养液上清NO浓度、细胞eNOS-mRNA基因表达水平（P＜0.01）；③在相应时间点，与正常组比较，低氧组培养液上清ET-1浓度、细胞ET-1-mRNA基因表达均增加（P＜0.05）；与低氧组比较，低氧+APN组培养液上清ET-1浓度、细胞ET-1-mRNA基因表达均显著降低（P＜0.01）。④Western blot结果显示，AMPK、Akt、eNOS、ERK1/2总蛋白表达不变；与正常组比较，低氧诱导的AMPK、PI3K、Akt、eNOS磷酸化水平下降（P＜0.05），而ERK1/2磷酸化水平升高（P＜0.05）；与低氧组对比，低氧+APN组增加低氧诱导的AMPK、PI3K、Akt、eNOS磷酸化水平（P＜0.05）；而ERK1/2磷酸化水平下降（P＜0.05）。
　　结论：在细胞水平首次证实，APN可能通过AMPK/PI3K/Akt/eNOS信号通路促进肺动脉内皮NO生成，通过ERK1/2/ET-1信号通路抑制肺动脉内皮合成和分泌ET-1。提示，APN可能成为潜在治疗HPH的辅助药物。

目录

声明

缩略语表

前言

文献回顾

一、肺动脉高压的诊断

二、肺循环生理

三、肺动脉高压的发病机制

四．脂联素与心血管的关系

实验一 脂联素促进低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞NO生成及机制研究

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4、讨论

实验二 脂联素抑制低氧诱导的大鼠肺微血管内皮细胞ET-1生成及机制研究

1 材料

2 方法

3 结果

4.讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢