小鼠创伤性脑损伤后miR-124的动态变化及其与轴索再生关系的研究

摘要

目的:
　　促进创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）后轴突的再生和正确致靶是神经外科研究领域的热点和难点。本课题以小鼠TBI模型为研究对象，分析TBI后创伤区微小核糖核酸124（microRNA-124，miR-124）的变化，并在体外实验中对其表达进行干预，通过体内体外实验探讨其与神经元轴突再生的关系，初步分析miR-124调节轴突生长与致靶的分子机制。
　　方法:
　　使用精确皮层打击仪-3000（precision cortical impactor-3000，PCI-3000）打击装置制作小鼠 TBI模型，并离体构建神经细胞机械划伤模型，从体内、体外两方面造模进行研究。使用神经纤毛蛋白-1（ neuropilin-1， Nrp-1）、微管相关蛋白（microtubule-associated proteinTau,Tau）和生长相关蛋白-43（growthassociated protein-43, Gap-43）标记轴突，通过蛋白质印迹实验（western blot）和免疫组化的方法检测这三种蛋白含量和阳性细胞数量的变化，间接反映轴突的生长情况。采用实时定量聚合酶连反应（real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）检测体内、体外miR-124表达变化。采用miR-124模拟物和抑制剂在体外干预miR-124的表达，观察其不同的表达量对轴突生长的影响。
　　结果:
　　1体内：miR-124表达量在创伤后3天达最高，western blot法检测，Nrp-1在创伤后3天达最高，Tau在创伤后14天达最高，Gap-43在创伤后1天持续高表达至21天。
　　2体外：miR-124和Nrp-1、Tau、Gap-43表达趋势相近于在体实验，表现出明显的正相关性。通过转染 miR-124模拟剂与抑制剂以干预体外培养的神经元后， miR-124的表达量均产生明显改变。选取创伤后24 h这一时间点进行对比，在相同时间点，Nrp-1，Tau和Gap-43的相对表达量均显著降低，且miR-124 inhibitor组降低较miR-124 mimic组更为显著（P＜0.05）。
　　结论:
　　1小鼠TBI后，miR-124的表达峰先于轴突标志物的表达峰出现，二者呈正相关，提示miR-124的表达增加可能与轴突再生有密切联系。
　　2过量产生或抑制miR-124表达，都不利于轴突的再生修复。其中，相比于过表达miR-124，在抑制miR-124表达后，轴突的修复受到的阻碍更明显。
　　3只有适度的miR-124表达才能更有助于轴突的再生和修复。
　　4 Gap43含量的持续高水平可能与轴突损伤修复和神经细胞发生、成熟均相关。

目录

声明

缩略语表

前言

文献回顾

1 颅脑创伤研究现况

2 miRNAs概述

3 miR-124概述

4 结语

第一部分 小鼠TBI后miR-124的动态变化及其与轴突再生的关系

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 小鼠皮层神经元机械损伤后miR-124的动态变化及意义

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢