Breg细胞在抗NMDAR脑炎发病中的作用及机制研究

摘要

研究背景： 抗 N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）脑炎是一类与神经元胞膜抗原相关抗体产生所引发的自身免疫性脑炎，目前已越来越受到人们的关注。患者的临床症状主要表现为显著的精神症状、癫痫发作、意识障碍及自主神经功能紊乱等。实验室脑脊液及血清抗体检测可辅助临床诊断。患者早确诊、早治疗对病情的恢复尤为重要。目前，尽管该病的发生与B细胞活化产生抗N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）抗体有关，但抗NMDAR脑炎的具体发病机制还不完全明确。已知Breg细胞在调节T细胞活化、B细胞产生抗体方面发挥重要作用，那么，Breg细胞是否参与抗NMDAR脑炎的发病、如何发挥作用、能否作为早期诊断指标值得深入研究。 研究目的： 探讨Breg细胞在抗NMDAR脑炎发病中的作用。 研究方法： 收集抗NMDAR脑炎患者16例。通过对患者的临床症状、脑电图及影像学资料进行分析、对脑脊液进行白细胞计数和细胞学染色、及以脑脊液作为一抗进行大鼠脑组织切片免疫荧光染色，观察患者的临床特征及脑脊液病理学改变。 通过流式细胞术，确认Breg细胞表面标志，检测患者外周血的Breg细胞比例，研究其与抗NMDAR脑炎的相关性。 进一步用磁珠分选出B、T细胞,分两个实验组：一组为剔除Breg细胞的B细胞与T细胞共培养组；另一组为不剔除Breg细胞的B细胞与T细胞共培养组，通过观察Breg细胞对T细胞功能的影响，探索Breg细胞在抗NMDAR脑炎的作用机制。 收集血清和/或脑脊液（CSF）检查自身免疫性脑炎相关抗体阳性的患者17例，收集外周血样本共计21例次：未治疗组6例次，治疗组15例次（其中，治疗后缓解组8例次，治疗后未缓解组7例次），健康对照者（对照组）外周血15例。采用流式细胞术（FCM）检测外周血单个核细胞（PBMC）中CD3+CD4+CXCR5+PD1+（即Tfh细胞）的比例，并分析Tfh细胞比例与患者疾病恢复程度的相关性。 研究结果： 对16例抗NMDAR脑炎患者的早期临床症状进行研究，发现多数患者出现了精神行为异常和抽搐；大部分的患者脑电图和 MRI结果异常；白细胞计数正常，脑脊液细胞学可出现淋巴细胞比例增高。以患者脑脊液作为一抗与大鼠脑组织切片共孵育并进行荧光染色呈现出阳性反应。 确认了CD19+CD24hiCD38hi为Breg细胞的表面标志；通过流式细胞术检测后发现抗NMDAR脑炎患者的外周血Breg细胞数量显著低于正常人。 进一步研究发现不去除Breg细胞的B细胞与T细胞共培养对T细胞的功能抑制作用显著强于去除Breg细胞的B细胞与T细胞共培养组。而患者的B细胞与T细胞进行共培养时，无论B细胞是否剔除Breg细胞，其对T细胞的抑制作用都是低下的，提示：患者由于Breg细胞数量减少及功能降低，对CD4+T分泌TNF-α和IFN-γ的抑制作用减弱。 流式细胞术检测结果显示未治疗组患者外周血 Tfh比例明显高于对照组（P＜0.001）且治疗未缓解组患者Tfh比例高于治疗缓解组（P＜0.05），而治疗缓解组患者Tfh比例与对照组比较，差异无统计学意义（p=0.107）。 结论： 1.抗NMDAR脑炎病人的首发症状以精神行为异常和抽搐多见，脑脊液细胞学常表现为淋巴细胞比例增高，患者的脑电图和MRI多为异常。 2.抗NMDAR脑炎患者外周血的Breg细胞数显著低于正常人。 3.正常人的Breg细胞对CD4+T细胞具有抑制作用，而患者的Breg细胞比例及功能均是低下的，提示：病理状态下，患者由于Breg细胞数量减少及功能降低，对CD4+T分泌TNF-α和IFN-γ的抑制作用减弱。使T细胞过度活化，促进了B细胞的活化和抗体产生，从而诱导了疾病的发生。 4.自身免疫性脑炎患者外周血Tfh比例升高可能与其疾病的发生发展相关。

目录

声明

缩略语表

前言

文献回顾

1.抗NMDAR脑炎的研究进展

2.Breg细胞的研究进展

3.滤泡辅助性T细胞（Tfh）

第一部分 抗NMDAR脑炎的临床表现及实验检查

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4. 讨论

第二部分 Breg细胞在抗NMDAR脑炎患者外周血中的改变

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4. 讨论

第三部分 Breg细胞免疫抑制功能研究

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4. 讨论

第四部分自身免疫性脑炎患者外周血Tfh细胞的检测及其临床意义

1. 材料

2. 方法

3. 结果

4. 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢