鸡H9N2亚型禽流感继发大肠杆菌感染的研究

摘要

本试验通过对SPF鸡滴鼻感染H9N2亚型禽流感病毒（CK/shandong/364/2013）后间隔不同时间气囊接种大肠杆菌（C14022502FX，血清型为O14），建立H9N2亚型禽流感继发大肠杆菌感染模型，对不同时间继发感染大肠杆菌的SPF鸡的发病率、血液中异嗜细胞百分比、呼吸系统吞噬细胞和异嗜细胞含量、肺脏细菌载量、肺脏病毒载量和肺脏病理组织学等进行动态研究，以初步确定H9N2亚型禽流感不同时期继发大肠杆菌感染过程中病毒和大肠杆菌在肺脏的复制情况和机体的基本反应情况，为H9N2亚型禽流感继发大肠杆菌感染发生机制的研究提供基础。
　　试验一鸡H9N2亚型禽流感继发大肠杆菌感染模型的建立
　　选取448只4周龄SPF鸡随机分为7组，每组64只，分别为细菌组，气囊接种大肠杆菌（107.08CFU/mL）；病毒组，滴鼻感染H9N2亚型AIV（1×10-7EID50/0.1 mL）；混合感染Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在滴鼻感染H9N2亚型AIV（1×10-7EID50/0.1 mL）后间隔0d、3 d、6 d和9 d接种大肠杆菌（107.08CFU/mL）；对照组不感染任何病原，隔离饲养。各组SPF鸡在感染病毒和（或）细菌后观察其临床症状，分别在最后一次感染病原后1 d、2 d、3 d和5 d每组随机取8只剖检观察病理变化，计算肺脏比重和观察肺脏病理组织学变化；各组剩余SPF鸡于最后一次感染病原后10 d全部剖杀，统计发病率。研究结果显示：除病毒组外，最后一次感染病原后各组SPF鸡均出现纤维素性心外膜炎、肝周炎和气囊炎等症状；空白对照组、病毒组、细菌组、混合感染Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的发病率分别是0、0、38.9％、45%、55%、35%、26.3%；混合感染Ⅱ组SPF鸡肺脏比重高于其它各组；除病毒组外，其它各组SPF鸡肺脏病变主要表现为：炎性细胞浸润、细支气管和肺脏组织间隙充满纤维素性渗出黏液，其中混合感染Ⅱ组的病理变化最为严重。结果表明，鸡感染H9N2亚型禽流感病毒后间隔3 d感染大肠杆菌发病情况最严重。
　　试验二 H9N2亚型禽流感继发大肠杆菌感染过程中SPF鸡呼吸系统吞噬细胞及血液中白细胞数量的变化
　　采集各组SPF鸡血液制作血涂片并染色，显微镜下选取5个随机视野进行白细胞计数、异嗜细胞计数，计算异嗜细胞百分比；用灭菌的生理盐水对各组SPF鸡呼吸系统进行灌洗，进行吞噬细胞计数，涂片染色计算异嗜细胞数。研究结果显示：混合感染组Ⅱ组SPF鸡血液中异嗜细胞比值最低，而呼吸系统吞噬细胞总数最多，且呼吸系统灌洗液中异嗜细胞总数高于其它混合感染组。结果表明，SPF鸡感染H9N2亚型禽流感病毒间隔3 d感染大肠杆菌其血液中异嗜细胞明显趋化到达呼吸系统，诱导呼吸系统明显炎症反应。
　　试验三 H9N2亚型禽流感继发大肠杆菌感染过程中SPF鸡肺脏中细菌载量和病毒载量的测定
　　采集各组SPF鸡肺脏进行研磨，取研磨液，进行十倍倍比稀释，采用倾注法测定其大肠杆菌载量、鸡胚接种测定其病毒载量。检测结果显示：混合感染Ⅱ组在最后一次感染病原后第3 d SPF鸡肺脏内细菌载量显著高于其它各组(P﹤0.05)，病毒载量变化在各组间无明显变化规律。结果表明，SPF鸡感染H9N2亚型禽流感病毒间隔3 d感染大肠杆菌其肺脏中大肠杆菌含量最高。

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第一章 文献综述

1 禽流感的病原学

2 H9N2亚型禽流感的研究

3 禽流感继发感染大肠杆菌的研究

4 本研究目的和意义

试验一 鸡H9N2亚型禽流感继发大肠杆菌感染模型的建立

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

试验二 H9N2亚型禽流感继发大肠杆菌感染过程中SPF鸡呼吸系统吞噬细胞及血液中白细胞数量变化

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

试验三 H9N2亚型禽流感继发大肠杆菌感染过程中SPF鸡肺脏细菌载量和病毒载量的变化

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

全文结论

参考文献

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