口虾蛄口胃神经系统的解剖学研究

摘要

采用神经节离体培养、HRP追踪技术和Lucifer Yellow追踪技术对甲壳动物口虾蛄(Oratosquilla oratoria)的口胃神经系统(stomatogastric nervous system，STNs)进行了初步研究。分别经侧胃神经(lateral ventricular nerve，lvn)、口胃神经(stomatogastric nerve，stn)食道下神经(infefioer oesophageal nerve，ion)、食道上神经(superiore oesophageal nerve，son)和贲门下神经(infefior ventricularnerve，ivn)对口虾蛄口胃神经系统的口胃神经节(stomatogastfic ganglion，STG)、食道神经节(oesophageal ganglion，OG)和围食道神经节(commissural ganglion，CoG)的支配关系进行了追踪。结果显示：(1)用HRP追踪技术经一侧的侧胃神经追踪时，可见大约8个阳性标记神经元位于口胃神经节远端胞体层的腹侧缘，中央神经纤维网也呈较强阳性反应；经口胃神经追踪时，STG前端胞体层可见5-6个弱阳性标记胞体及阳性标记的神经纤维，OG中可见2个胞体被标记，中央纤维网中也有较强的阳性标记末梢；经一侧ion追踪时，OG胞体层中可见4个阳性标记胞体及部分阳性纤维，而CoG中仅见阳性标记纤维存在于中央纤维网。(2)运用Lucifer Yellow追踪技术结果表明：经一侧的lvn追踪时，STG腹面观可见阳性标记的一束神经纤维从lvn延伸到STG的中央神经纤维网，然后再有神经突起向胞体区延伸到阳性标记神经元大约14个；从stn切口端追踪，在STG远端胞体区可见大约15个弱阳性标记神经元和中央神经纤维网的阳性标记；从son切口端向STG方向追踪，阳性突起沿son有3-5条神经纤维经stn进入STG，一条在进入STG神经纤维网并发出分支。另一条神经突起进入神经节后在STG近端右侧一强阳性神经元紧密连接；经ion切口端追踪，在OG的腹侧胞体层中4个神经元标记为阳性，在神经纤维网有数条粗的神经元突起被标记为阳性；经ion切口端追踪CoGs，在CoGs的远端胞体层有大约7个神经元标记为阳性；经ivn切口端追踪，在OG的腹侧胞体层中有6-7个神经元标记为阳性；中央神经纤维及神经末梢也有大量阳性标记。 运用组织化学方法对口虾蛄STNs的STG和OG进行了AchE组织化学定位。结果表明AchE主要定位于STG和OG的中央神经纤维网(neuropile)，在胞体区主要标记到神经元的外膜，细胞内没有阳性反应。运用免疫组织化学染色方法，研究了传统神经递质乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)、谷氨酸(glutamate，Glu)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)、多巴胺(dopamine，DA)和神经肽生长抑素(somatostatin，SOM)、P物质(substance P，SP)和促皮质激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)在口虾蛄STNs中的分布。结果表明：(1)AchE的阳性标记主要定位在STG和OG的神经纤维网和细胞膜及细胞间隙。(2)在单胺类神经递质中DA在STG中仅见阳性神经纤维无阳性神经元，但在OG中有11个神经元被标记为阳性，并且可见其发出的神经突起也被标记为阳性，CoGs中的阳性神经元分散分布于整个神经节：5-HT免疫组化染色中，在STG腹侧和远端的胞体区有大约15个神经元有弱阳性标记，在OG腹侧5个神经元有阳性标记，STG和OG神经纤维网也大面积被标记为阳性。(3)在氨基酸类神经递质中，Glu和GABA主要分布在STNs各神经节的神经纤维网，细胞间隙和神经元外膜上，标记的神经元阳性较弱。(4)神经肽类，SOM在STG的腹侧胞体层标记了大约有20个左右的神经元的细胞核区域，在OG标记了3个神经元的细胞核；SP在STG的腹侧中央偏左有聚集在一起的4个小型神经元标记为阳性，在OG中部有4个神经元标记为阳性。而ACTH的阳性反应呈颗粒状弥散分布在整个STNs。结论：通过神经束路追踪技术，我们的研究大体勾画出了STNs各神经节，以及和脑神经节之间的部分联系，能够从形态上更直观清楚地展示口胃神经系统各神经节的神经传输与支配关系。通过组化及免疫组化的方法，我们大体了解乙酰胆碱等五种神经递质和SOM等三种神经肽在口虾蛄口胃神经系统都有分布，为进一步了解STNs的生理功能奠定了一定的基础。

目录

文摘

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论文说明：缩略词

声明

前言

第一章口胃神经系统研究概况

1口胃神经系统

2神经束路追踪相关研究现状

3 STNs相关组织化学和免疫细胞化学研究现状

3.1 STNs乙酰胆碱类神经递质的研究进展

3.2 STNs单胺类神经递质的研究进展

3.3 STNs氨基酸类神经递质的研究进展

3.4神经肽方面的研究进展

4口胃神经系统其它相关研究概况

第二章实验材料与方法

1实验材料

1.1 实验动物

1.2化学试剂

1.3仪器设备

2实验方法

2.1 AchE常规组织化学定位方法

2.2神经束路追踪方法

2.3整体免疫组织化学定位方法

2.4图像分析方法

第三章结果分析

1口虾蛄口胃神经系统的解剖学位置

2口胃神经系统神经束路追踪

2.1 HRP追踪结果

2.2 Lucifer Yellow追踪结果

3 STNs相关神经递质的形态学定位研究

3.1 口胃神经系统乙酰胆碱酯酶的定位

3.2 DA免疫组织化学研究

3.3 5-HT免疫组织化学研究

3.4 Glu免疫组织化学研究

3.5 GABA免疫组织化学研究

3.6 SOM免疫组织化学研究

3.7 SP免疫组织化学研究

3.8 ACTH免疫组织化学研究

第四章讨论

1相关实验方法分析

1.1 神经束路追踪方法的分析

1.2免疫组织化学方法的分析

2神经束路追踪的研究分析

3组化和免疫组化研究分析

第五章结论

1神经束路追踪结果反映了STNs各神经节及神经传输支配关系

2口虾蛄的STNs存在多种神经递质和神经肽

参考文献

致谢

图版

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