STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答

摘要

实验目的：观察可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen，STAg)和IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜和系统免疫应答及持续时间，研究其抗弓形虫感染的能力，探讨STAg和IFN-γ滴鼻免疫诱导的免疫应答机制，为鼻内弓形虫复合疫苗研制提供实验依据。 实验方法：本研究分三部分：第一部分观察鼻内给予IFN-γ对小鼠的抗弓形虫感染的保护作用。将6～7周龄BALB/c小鼠45只随机分为3个组，每组15只，分别经口感染弓形虫速殖子前或后鼻内给予IFN-γ或感染前鼻内给予注射用水(对照组)，观察小鼠健康状况及死亡情况，在感染后第30天处死小鼠，计数肝、脾、脑组织内弓形虫速殖子。 第二部分观察IFN-γ作为佐剂的弓形虫STAg疫苗免疫效果观察。将5～6周龄雌性BALB/c小鼠45只随机分3个组，分别用20μgSTAg、20μgSTAg+1000UIFN-γ鼻内免疫小鼠2次，对照组用等量PBS滴鼻，间隔14天。末次免疫后第10天，用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击，逐日记录小鼠体重，观察小鼠存活情况。攻击后第43天处死全部小鼠，分离计数脑、肝组织速殖子；计数IEL、PP结和脾T淋巴细胞；ELISA法检测小鼠鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液、粪便中弓形虫特异性IgA和血清IgG抗体。 第三部分观察STAg抗原联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导黏膜及系统免疫应答持续时间。BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组，实验组以STAg(20ug/只)为抗原、IFN-γ(1000U/只)为佐剂滴鼻免疫，对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次，间隔2周，分别于未免疫时、首次免疫后第2周、加强免疫后第2、4、6、8、10周处死小鼠。ELISA法测定血清及鼻咽、肺、肠冲洗液IgA、IgG变化；称取胸腺、脾脏重量；分离脾、肠上皮内淋巴细胞(intestinalintraepitheliallymphocytes，IEL)并计数。 结果：第一部分小鼠感染前和感染后鼻内给予IFN-γ，存活率(P＞0.05)和体重(P＜0.01)高于对照组，肝、脾、脑中速殖子的数量显著低于对照组(P＜0.01)。 第二部分STAg+IFN-γ组小鼠存活率显著高于STAg组和对照组(P＜0.05)；脑、肝组织内速殖子虫荷比STAg组和对照组显著减少(P＜0.01)；IEL、PP结和脾T淋巴细胞都发生了显著增殖性应答，与STAg和对照组相比增生明显(P＜0.05)，鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液弓形虫特异性IgA显著增高，显著高于对照组(P＜0.05)；血清IgG抗体显著高于STAg和对照组(P＜0.01)。 第三部分实验中小鼠胸腺重量减轻，但组间无差异。小鼠脾脏在首次免疫后第2周和加强免疫后第2、4体积增大，重量增加(P＜0.05)。免疫后小鼠IEL和脾淋巴细胞均有增生，IEL于加强免疫后第2周最高，加强免疫后第2、4高于对照组(P＜0.01)；脾淋巴细胞首次免疫后第2周、加强免疫第2周高于对照组(P＜0.01)。小鼠免疫后不同黏膜及系统部位的抗体水平明显升高，血清中IgG抗体增生显著，加强免疫后第2周达峰值，至第10周时仍高于对照组，首次免疫后第2周和加强免疫后第2周差异显著(P＜0.01)； 鼻咽冲洗液中主要以IgA抗体为主，免疫后IgA抗体逐渐增高，加强免疫后第2周达高峰，至第10周仍高于对照组水平，首次免疫后第2周和加强免疫后第2、4、6周显著高于对照组(P＜0.05)，实验组首次免疫后第2周和加强免疫后第2周IgG抗体第2、4周高于对照组(P＜0.05)；小鼠肺冲洗液中也是以IgA抗体为主，实验组加强免疫后第2、4、6周显著高于对照组(P＜0.05)，IgG抗体加强免疫后第2周高于对照组(P＜0.05)。小鼠肠道冲洗液中以IgA抗体为主，IgA抗体免疫后逐渐升高，与对照组相比，首次免疫后第2周、加强免疫后第2、4周有显著性差异(P＜0.05)，IgG抗体首次免疫后第2周，加强免疫后第2、4、6周高于对照组水平(P＜0.05)。 结论：在感染前或后鼻内给予IFN-γ对小鼠弓形虫感染具有保护作用；IFN-γ有明显的佐剂效应；STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导黏膜及系统免疫应答，且可持续较长时间。

目录

缩略词

摘要

第一章 文献综述肠上皮内淋巴细胞抗弓形虫感染的免疫功能研究进展

第二章 实验一鼻内给予IFN-γ对弓形虫感染小鼠的保护作用

第三章 实验二IFN-γ为佐剂的弓形虫STAg疫苗鼻内免疫效果观察

第四章实验三弓形虫STAg抗原联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导黏膜及系统免疫应答持续时间的观察

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