降温顺序对猪主动脉瓣制备保存影响的实验研究

摘要

目的：确定猪主动脉瓣保存过程中在相变点时较为合理的降温顺序。促进牛物瓣膜保存技术的提高，进一步延长生物瓣膜的使用寿命。 方法：本课题于猪宰杀后20min内清洁条件下取出心脏，立即置于冰生理盐水运送，无菌条件下取带瓣主动脉，清洗、修剪、将瓣环置入含抗生素的M199营养液中。37℃下孵化、灭菌处理，进行细菌学检测。将灭菌后的心脏瓣膜用M199液漂洗三次，漂洗后先在4℃冰箱平衡15min。然后瓣膜置入冻存管中，加入冻存液(含10％二甲基亚砜、10％胎牛血清、80％M199)后标记，放入程控降温仪，设定程序，测量猪丰动脉瓣膜的相变点(0℃--4℃)，并以-1℃/min的速率通过程序降温降至0℃，然后在相变点时以不同的降温速率(分别以-1℃/rain、-2℃/min、-3℃/min、-4℃/min、-5℃/min分为5组)降温，待降至-4℃时，继续以-1℃/min的速率降温至-60℃，将程序降温仪降温后瓣膜组织置于-80℃的冰箱，使其在-80℃恒温状态下保存24小时后移入液氮贮存，14天后复温检测。在各实验组之间，通过对瓣膜组织结构、超微结构、理化性质及牛物力学等特性的评价，探讨相变点时生物瓣组织结构不同降温速率中的最佳速率，用以确定生物瓣保存过程中最佳的程序降温顺序，进一步延长生物瓣膜的使用寿命。 结果：猪主动脉瓣膜相变点为0℃--4℃；组织学结果显示，-4℃/min组瓣膜表面内皮细胞较完整。各层结构清晰可辨，纤维网架结构保持完整。其他各组内皮细胞脱落多见，内皮下胶原较为松散，偶有胶原纤维断裂现象；扫描电镜显示-4℃/min组瓣膜表面内皮细胞覆盖较完整，其他各组可见散在或小片状内皮细胞，较为局限。细胞下纤维成分均清晰可见；透射电镜示-4℃/min组细胞形态较为一致，细胞呈卵圆形或柱形，细胞表面有绒毛状突起，细胞内可见大量质膜小泡、内质网、线粒体等结构。其他各组细胞溶解、破裂现象较为常见；各组瓣叶厚度未见明显差异(F=0.807；P=0.54)；瓣膜组织含水量随着组别呈逐渐增高趋势(F=8.238；P=0.001)；组织热皱缩温度-4℃/min组与其他各组均有显著性差异(F=4.674；P=0.012)。其余各组之间无显著性差异；生物力学特性-4℃/min组与其他四组瓣膜相比破坏强度(F=3.904；P=0.023)及伸长比(F=15.752；P=0.000)有显著性差异，其他各组之间无统计学意义。 结论：0℃--4℃为猪主动脉瓣膜的相变温度；相变点时增加降温速率可以改善瓣膜保存状况；猪丰动脉瓣膜制备保存过程中以-1℃/min的降温速率常规降温，相变点时给予增加至-4℃/min，超过相变点后仍以-1℃/min进行的降温顺序是目前猪主动脉瓣膜制备保存中最为有效的方法。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

1.前言

2.材料和方法

3.统计学方法:

4.实验结果:

5.结论

6.讨论

参考文献:

附表:

附图:

个人简历

致 谢