弓形虫可溶性速殖子抗原的免疫原性蛋白质组学分析

摘要

目的:刚地弓形虫是人和动物感染率极高的一种机会致病原虫，其中速殖子阶段是主要的致病阶段。速殖子的大规模全蛋白质组学分析仍然还在进行，但目前尚无弓形虫的完全蛋白质组图。所以本研究应用蛋白质组学技术分析刚地弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen，STAg)组分，寻找具有免疫原性的抗原，为弓形虫疫苗有效候选抗原研究提供理论和实验依据。 方法:常规复苏弓形虫速殖子，腹腔接种BALB/c小鼠，转种3次恢复其活力，收集腹腔冲洗液，纯化，离心，上清液即为STAg，用三氯醋酸丙酮沉淀法制备2-DE样品。STAg样品，通过等电聚焦和SDS-PAGE电泳技术分离获得弓形虫STAg组分全蛋白点，用兔抗弓形虫血清和兔纯血清(阴性对照)做免疫印迹获得免疫原性的蛋白点。切取这些点、进行胶内酶解，ABI4700质谱仪对蛋白点进行鉴定分析。 结果: 2-DE凝胶图显示1227个蛋白斑点，经质谱对其鉴定，得到230个弓形虫蛋白点，Western blot检测显示，16个蛋白点具有免疫原性。这些蛋白点中，主要表面抗原1(SAG1，4个斑点)曾有报道具有免疫原性，热休克蛋白70(Hsp70)的免疫原性尚存在争议，其余的这些蛋白点;假定的蛋白质二硫键异构酶(putative protein disulfide isomerase)，冠蛋白(coronin)，热休克蛋白60(Hsp60)，丙酮酸激酶(pyruvate kinase)2个点斑点，谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase，putativ)，，蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1)，苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase)，尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase)2个斑点和过氧化氧化还原蛋白(peroxiredoxin)都具有免疫原性均为本研究新发现。 结论:对所得到的16个阳性蛋白点进行分析，除SAG1(P30)和Hsp70外，其余9种具有免疫原性的抗原均为本研究新发现。这些免疫原性的蛋白点均非表面抗原或排泄-分泌抗原，而是存在于速殖子内。此结果提示，弓形虫速殖子内存在一些尚未证实的免疫原性抗原，可能具有更强的保护性，有深入研究的必要性，可作为弓形虫免疫诊断和疫苗研发新的候选分子。

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文摘

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声明

第一章实验 弓形虫可溶性速殖子抗原组分抗原性蛋白质组分析

引言

第一部分弓形虫可溶性速殖子抗原的分离与免疫原性检测

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分弓形虫可溶性速殖子抗原的质谱分析

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第一章文献综述 蛋白质组学技术及其在弓形虫研究中的应用

致谢

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