ESAT-6、CFP-10及rCFP10-ESAT6在艾滋病合并结核杆菌感染诊断价值中的研究

摘要

目的:构建结核重组抗原ESAT-6、CFP-10及融合抗原rCFP10-ESAT6原核表达载体,经IPTG诱导表达,并在大肠埃希菌进行原核表达。获得纯化的蛋白产物,通过检测三者作为抗原刺激物在HIV感染者中的特异性T细胞反应,为建立艾滋病合并结核感染的诊断方法提供科学的实验依据。 方法:应用融合PCR(Fusion PCR)技术,从结核分枝杆菌基因组(HB37v)中成功克隆获得ESAT-6、CFP-10基因及rCFP10-ESAT6融合基因,连接到pGEM-T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)和pET-28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化重组蛋白及融合蛋白；通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blotting免疫印迹分析、酶联免疫吸附试验(ELISA)证实表达蛋白抗原特异性；并将三种纯化好的表达蛋白作为抗原,以健康者、确诊的活动性结核患者分别作为阴性对照、阳性对照,采用酶联免疫斑点技术(enzyme-linked immuno-spot,Elispot)检测HIV感染者中特异性T细胞反应,通过患者外周血干扰素-γ分泌量的测定,判断其是否合并结核杆菌感染。 结论:利用大肠埃希菌BL21(DE3)成功表达、纯化了具有良好抗原性的ESAT-6、CFP-10重组蛋白和rCFP10-ESAT6融合蛋白,并以三种蛋白分别作为抗原刺激物,利用Elispot方法对HIV合并结核感染进行检测,为早期无结核病临床表现的潜在结核感染者的发现提供了可能,同时为艾滋病合并结核感染诊断平台的建立提供了理论依据。

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文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

声明

前 言

实验技术概述

第一部分 结核特异性抗原ESAT-6、CFP10及rCFP10-ESAT6生物信息学分析及表达载体的构建

材料与方法

结果

讨论

第二部分 结核特异性抗原ESAT-6、CFP10及rCFP10-ESAT6基因在大肠埃希菌中的重组表达及其比较

材料与方法

结果

讨论

第三部分 结核抗原ESAT-6、CFP10及rCFP10-ESAT6检测艾滋病合并结核杆菌感染中特异性T细胞反应

材料与方法

结果

讨论

参考文献

小结和展望

综述 利用外周血干扰素-γ测定法诊断艾滋病合并结核杆菌感染中的研究进展

个人简历

致谢