雌激素对EAE大鼠细胞凋亡及调控基因Bcl-2、Bax的影响

摘要

目的：建立Wistar大鼠去卵巢后实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)动物模型，观察雌二醇(estradiol，E2)对EAE的治疗效果，及其对EAE中枢神经系统炎症浸润细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响，为临床应用E2治疗多发性硬化(mltiplesclerosis，MS)提供实验依据。 方法：1.四肢足掌皮内注射完全福氏佐剂-豚鼠全脊髓匀浆(CFA-GPSCH)，并辅以注射百日咳疫苗，诱导去卵巢Wistar大鼠建立EAE模型。将去卵巢雌性Wistar大鼠随机分为对照组、EAE组和E2治疗组，免疫后第0天E2治疗组肌肉注射E2500μg/kg·d，对照组及EAE组给予等体积的花生油注射，免疫后第20天停止注射。观察各组的发病情况至30天。放射免疫法测血清E2浓度。2.发病后三天处死动物，用HE染色观察中枢神经系统炎症细胞浸润程度，用3'末端脱氧核糖核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测其细胞凋亡情况。免疫组化检测浸润细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。放射免疫法测血清E2浓度。 结果：1.对照组未见发病，体重增高最高值10.12±1.28。EAE组发病率为83.3％，潜伏期12.10±0.99天，症状持续时间14.00±1.15，临床评分最高值3.10±0.99，体重降低最高值28.50±1.85：E2治疗组发病率为33.3％，潜伏期为15.50±1.29，症状持续时间12.00±0.82，临床评分最高1.50±0.58，体重降低最高值22.68±1.53。与EAE组相比，E2治疗组发病率、潜伏期、症状持续时间、临床评分最高值、体重降低最高值差别均有统计学意义(p<0.05)。对照组血清E2浓度为11.53±2.87pmol/l，EAE组血清E2浓度为10.62±1.35pmol/l，E2治疗组血清E2浓度为78.25±0.46pmol/l，对照组和EAE组血清E2浓度差别无统计学意义(p>0.05)，E2治疗组与对照组、EAE组血清E2浓度比较有显著统计学意义(p<0.01)。2.对照组大鼠未见明显异常病理改变。EAE组血管周围炎症浸润细胞数为70.19±20.79，凋亡细胞数为5.26±4.43，凋亡率6.97％；E2治疗组血管周围炎症浸润细胞数为42.35±24.38，凋亡细胞数为6.08±3.50，凋亡率13.34％，两组相比差异有明显统计学意义(p<0.05)。EAE组每个浸润细胞Bcl-2的积分光密度为49.29±18.23，Bax的积分光密度为25.38±17.85，Bcl-2/Bax为2.28±0.65；E2治疗组每个浸润细胞Bcl-2的积分光密度为30.33±16.75，Bax的积分光密度为26.75±14.41，Bcl-2/Bax为1.24±0.13，两组相比，每个浸润细胞Bcl-2的积分光密度差异有统计学意义(p<0.05)，Bax的积分光密度差异无统计学意义(p>0.05)，Bcl-2/Bax差异有统计学意义(p<0.05)。EAE组血清E2浓度为17.43±2.36pmol/l，E2治疗组血清E2浓度为2983.21±162.78pmol/l，两组比较血清E2浓度有显著统计学意义(p<0.01)。 结论：1.雌二醇可有效地抑制EAE的发病。2.雌二醇可能通过抑制EAE中枢神经系统血管周围炎性浸润细胞Bcl-2表达，降低Bcl-2/Bax的比值，从而提高炎性浸润细胞的凋亡率，减少炎性浸润细胞数目，从而减轻EAE的病情，这可能是E2治疗EAE的作用机制之一。

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材料和方法

结 果

讨论

结论

参考文献

附录

综述 雌激素与实验性自身免疫性脑脊髓炎中细胞凋亡关系的研究进展

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