吴茱萸、穿心莲等中药材化学成分分离纯化方法研究

摘要

我国传统中药种类繁多，各种药材所含有的化学成分很是复杂，含量也相对较少。因而，从传统中药中分离纯化出有效成分对于临床医学的药理作用研究及含量的测定具有较为深远的影响。
　　本文分别应用超临界流体色谱(supercritical fluid chromatography, SFC)和制备型高效液相色谱(preparative high performance liquid chromatography, PHPLC)对吴茱萸、穿心莲、木蝴蝶及知母中的化学成分进行分离与纯化，所得到的化合物的纯度经高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)进行了检测，并采用质谱(MS)、紫外光谱(UV)和核磁共振波谱(NMR)对所得到的化合物的结构进行了鉴定。
　　1. SFC分离纯化吴茱萸中两种生物碱类成分研究
　　使用超临界二氧化碳(SC-CO2)作为SFC流动相的主体，添加一定量的改性剂(如：甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈等)，建立了从吴茱萸中分离纯化吴茱萸碱与吴茱萸次碱等成分的 SFC方法。在一定研究范围内，通过考察色谱柱的类型、改性剂种类及含量、流速、压力和温度等条件对分离效果的影响，最终确立了从吴茱萸中分离纯化吴茱萸碱与吴茱萸次碱的最适宜的色谱条件。从吴茱萸中分离纯化得到的化合物的纯度经HPLC检测分别为99.5％和99.8%，经UV和NMR鉴定得到吴茱萸碱与吴茱萸次碱的化学结构。通过实验数据，拟合得到van’t Hoff曲线，进一步探讨了SFC分离过程的热力学变化规律。将吴茱萸碱与吴茱萸次碱从流动相到固定相分配过程中的焓变差值与熵变差值进行比较，结果表明：在该条件下，从吴茱萸中分离纯化吴茱萸碱与吴茱萸次碱的SFC过程为焓控制的过程。
　　2. SFC分离纯化穿心莲中两种二萜内酯类成分研究
　　使用SC-CO2作为 SFC流动相的主体，添加一定量的改性剂(如：甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈等)，建立了从穿心莲中分离纯化穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯等化学成分的SFC方法。在一定研究范围内，通过考察色谱柱的类型、改性剂种类及含量、流速、压力、温度等条件对分离效果的影响，最终确立了从穿心莲中分离纯化穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的最适宜的色谱条件。从穿心莲中分离纯化得到的化合物的纯度经HPLC检测分别为99.1%和98.5%，经UV和NMR鉴定得到穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的化学结构。通过实验数据，拟合得到van’t Hoff曲线，进一步探讨了SFC分离过程的热力学变化规律。将穿心莲中的穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯从流动相到固定相分配过程中的焓变差值与熵变差值进行比较，结果表明：在该条件下，从穿心莲中分离纯化穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的SFC过程为焓控制的过程。
　　3. PHPLC分离纯化木蝴蝶中的两种黄酮类成分
　　实验中以甲醇-水为流动相，建立了从木蝴蝶中分离纯化黄芩素-7-O-葡萄糖苷和黄芩素-7-O-双葡萄糖苷的PHPLC方法。采用C18柱(250 mm×25.4 mm I.D.,10μm)，以甲醇-水(45:55, V/V)作为流动相进行等度洗脱，上样量为20 mg，流速为30 mL/min，检测波长设定为280 nm。从木蝴蝶中分离纯化所得到的两种化合物的纯度经 HPLC检测分别为98.1%和98.9%；然后再采用MS、UV、NMR鉴定，得到黄芩素-7-O-葡萄糖苷和黄芩素-7-O-双葡萄糖苷的化学结构。
　　4. PHPLC分离纯化知母中的两种黄酮类成分
　　实验中以甲醇-水为流动相，建立了从知母中分离纯化的芒果苷和新芒果苷的PHPLC方法。采用C18柱(250 mm×25.4 mm I.D.,10μm)，流动相为甲醇-水(35:65, V/V)等度洗脱，上样量为27.6 mg，流速为35 mL/min，检测波长设定为254 nm。从知母中分离得到的两种单体成分，经HPLC检测，其纯度分别为98.4%和99.1%；其化学结构经MS、UV、NMR鉴定为芒果苷和新芒果苷。

目录

声明

前言

第一章 绪论

1.1 本课题的研究目的及意义

1.2 SFC的简介及应用

1.3 PHPLC的简介及应用

1.4 本课题的研究内容及思路

第二章 SFC分离纯化吴茱萸中的两种主要生物碱类成分

2.1 引言

2.2 实验部分

2.3 结果与讨论

2.4 小结

第三章 SFC分离纯化穿心莲中的两种二萜内酯类成分

3.1 引言

3.2 实验部分

3.3 结果与讨论

3.4 小结

第四章 PHPLC分离纯化木蝴蝶中的两种黄酮类成分

4.1 引言

4.2 实验部分

4.3 结果与分析

4.4 小结

第五章 PHPLC分离纯化知母中的两种黄酮类成分

5.1 引言

5.2 实验部分

5.3 结果与分析

5.4 小结

第六章 结论与展望

参考文献

附录

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文