MHC相合造血干细胞移植后cGVHD小鼠模型的实验研究

摘要

异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，allo-HSCT)是治疗恶性血液病、某些自身免疫性疾病及实体瘤等的重要手段，特别是近年来随着非清髓性干细胞移植的开展，给更多患者带来了希望。但是移植物抗宿主病(Graft-versus-host disease，GVHD)仍是移植后的主要并发症，是引起移植失败及患者死亡的主要原因之一。慢性移植物抗宿主病(Chronic graft-versus-hostdisease，cGVHD)的临床表现错综复杂，在疾病的预防和治疗方面尚无系统、有效的策略。究其原因是我们对cGVHD的发病机理还不是十分清楚。为了能更加深入理解cGVHD的发病机制，寻求疾病的预防和治疗新方法，首先要根据实验研究目的，进行选择和建立适合的cGVHD小鼠模型的实验研究。
　　 [目的]：
　　 临床移植中主要组织相容性复合物(maJor histocompatibility antigen，MHC)不匹配移植方式确实增加了发生cGVHD的可能。然而在人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)匹配的兄妹间移植仍有近40％的患者发生cGVHD。因此，为了寻求一种更接近临床慢性移植物抗宿主病综合症的动物模型，我们选择MHC匹配，次要组织相容性抗原(Minor histocompatibility antigens，miHAs)不匹配的小鼠建立cGVHD动物模型，并在模型建立的基础上进一步研究疾病的发病机理和防治新措施。
　　 [方法]：
　　 以近交系8～12周的雄性DBA/2H-2d为供鼠，近交系8～12周雌性BALB/cH-2d小鼠为受鼠，移植前受鼠接受60Co5.5Gy全身照射的预处理，随后采用随机数字表法分成3组，移植组(B、C组)分别经尾静脉输注5×107个脾细胞/只、10×107个脾细胞/只，对照组(A组)输注0.5mlRPMI1640培养液。观察指标：①每周采血一次，观察造血重建情况；②实验终点行染色体核型分析观察植入情况；③观察小鼠的临床表现并于移植后14天开始每3天进行一次评分；④实验终点观察小鼠的病理变化并评分，根据病理结果，判断小鼠的成模率。⑤实验终点ELISA法检测血清抗ds-DNA、B淋巴细胞活化因子(Bcell-activating factor belonging to the tumor necrosis factor family，BAFF)的含量。
　　 统计学方法：实验数据应用SPSS16.0统计软件进行处理，实验数据用Mean士SD或中位数表示，不同时间点外周血白细胞变化采用重复测量资料的方差分析，临床评分和病理学评分采用非参数检验，患病率用Kaplan-Meier法生存曲线表示，并用log-rank检验，定量资料多组比较采用F检验。以a=0.05作为显著性差异的检验水准。
　　 [结果]：
　　 ①造血重建检查：各组小鼠在移植4周后白细胞数量逐渐恢复正常，移植组恢复相对缓慢；②植入情况检测：对B、C组小鼠进行外周单个核细胞的染色体检查，均为混合嵌合体；③cGVHD临床评分：A组均未出现cGVHD的临床表现，B、C组小鼠出现cGVHD临床表现，两组的临床评分有统计学差异(P＜0.05)。④病理学改变评分：A组病理学检查未出现cGVHD表现；B、C两组出现cGVHD的病理学改变，但是两组评分无统计学差异(P＞0.05)；根据病理学评分判断各组小鼠的患病率分别为0％、60％、80％，患病率无统计学差异(P＞0.05)。⑤ELISA检测BAFF和抗dsDNA：患病组小鼠的血清BAFF和抗dsDNA含量与对照组之间有统计学意义(P＜0.05)，而且患病组小鼠血清BAFF和抗dsDNA之间有关联性。
　　 [结论]：
　　 1.MHC相合的DBA-2(H-2d)、BALB/C(H-2d)小鼠分别为供、受鼠，受鼠经60Co5.5Gy全身照射预处理后，输注供鼠脾细胞5×107个/只和10×107个/只，均可以诱导出cGVHD小鼠模型，但是5×107个脾细胞组小鼠的临床特征和病理学表现更为稳定，而且实验小鼠生存率高，可以作为理想的MHC相合造血干细胞移植后cGVHD小鼠模型。
　　 2.患病小鼠血清BAFF含量伴随cGVHD的发生而升高，提示异常表达的BAFF与cGVHD的发生、发展有一定关系，为cGVHD发病机制和诊治新方法的研究提供实验基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略表

声明

前言

1.实验材料与方法

2.结果

3.讨论

参考文献

全文结论

问题与展望

附图

综述:慢性移植物抗宿主病的治疗

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