马钱子碱对人白血病细胞株K562细胞的诱导凋亡作用的实验研究

摘要

目的：观察马钱子碱对人白血病细胞株（K562细胞）的生长抑制作用和诱导凋亡作用。
　　 方法
　　 1.观察马钱子碱对K562细胞的生长抑制作用：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度（0、50、100、200、400、800μg/ml）马钱子碱分别作用24h，48h，72h时对K562细胞生长抑制作用。
　　 2.观察马钱子碱作用K562细胞后的形态学特征：应用AO/EB 荧光染色，在490nm 激发波长的荧光显微镜下观察马钱子碱作用72h后的K562细胞形态学的变化。
　　 3.细胞水平检测马钱子碱诱导K562细胞凋亡的作用：应用Annexin-V/PI细胞凋亡检测法检测不同浓度（0、50、100、200、400、800μg/ml）马钱子碱作用72h时对K562细胞的诱导凋亡作用。
　　 4.分子水平检测马钱子碱诱导K562细胞凋亡的作用：应用DNA-ladder 片段凝胶电泳检测400μg/ml 马钱子碱作用72h后K562细胞形成的凋亡梯状条带，验证马钱子碱对K562细胞的诱导凋亡作用。
　　 结果
　　 1.马钱子碱对K562细胞生长抑制作用浓度50～800μg/ml 各实验组与对照组马钱子碱作用K562细胞在A570nm 处的吸光度值（OD）相比，差异具有统计学意义（P＜0.01）；50、100、200μg/ml浓度组与400μg/ml浓度组马钱子碱作用K562细胞在A570nm 处的OD值相比，差异具有统计学意义（P＜0.01），800μg/ml与400μg/ml 马钱子碱作用K562细胞在A570nm 处的OD值相比差异没有统计学意义（P＞0.05）；马钱子碱作用K562细胞24h，48h，72h时的IC50分别为：184μg/ml，107μg/ml，83μg/ml。
　　 2.马钱子碱作用K562细胞后形态学特征 AO-EB 荧光复合染色结果显示：对照组大部分细胞大小、形态较均一，胞核及胞浆呈均匀绿色荧光，呈现未凋亡形态特征；K562细胞经浓度为400μg/ml 马钱子碱作用72h后，约80％的细胞核染色质被EB 染成桔红色并呈固缩状或圆珠状，显示细胞凋亡形态特征。
　　 3.细胞水平检测马钱子碱诱导K562细胞凋亡的作用 K562细胞经50～800μg/ml 马钱子碱作用72h后，对照组、50、100、200、400和800μg/ml组K562细胞早期凋亡率分别为（3.45±0.821）％、（16.0±1.563）％、（36.9±2.370）％、（57.2±2.505）％、（87.1±4.018）％、（72.3±1.137）％，浓度为400μg/ml时K562细胞凋亡率最高，达87.1％。各实验组与对照组相比，差异具有统计学意义（P＜0.01）；50、100、200μg/ml浓度组与400μg/ml浓度组K562细胞凋亡率相比，差异具有统计学意义（P＜0.01），800μg/ml与400μg/ml浓度组K562细胞凋亡率差异没有统计学意义（P＞0.05）。
　　 4.分子水平检测马钱子碱诱导K562细胞凋亡的作用 K562细胞经400μg/ml 马钱子碱作用72h后，DNA 琼脂糖电泳显示细胞凋亡梯状条带，证实马钱子碱具有诱导K562细胞凋亡的作用。
　　 结论
　　 1.马钱子碱具有抑制K562细胞生长的作用。在0～400μg/ml 范围内，抑制率随马钱子碱浓度的增高、作用时间的延长而增高。马钱子碱作用K562细胞24h，48h，72h时的IC50分别为：184μg/ml，107μg/ml，83μg/ml，随着时间的延长，马钱子碱对K562细胞的生长抑制能力加强。
　　 2.马钱子碱具有诱导K562细胞凋亡的作用。通过应用AO/EB 荧光染色、Annexin-Ⅴ/PI细胞凋亡检测法、DNA-ladder 片段凝胶电泳检测马钱子碱对K562细胞凋亡的影响，实验结果一致证实马钱子碱可诱导K562细胞凋亡，诱导其凋亡的作用在一定范围内呈剂量效应关系。
　　 3.为今后研究马钱子碱抗肿瘤作用的分子机制奠定基础。本实验研究显示马钱子碱有明显抑制K562细胞生长的作用和诱导K562细胞凋亡的作用，并且该抑制作用可能是通过诱导细胞凋亡所致，这将为今后研究马钱子碱诱导K562细胞凋亡的可能途径及抗肿瘤作用的分子机制提供一定的实验依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

第一章 前言

第二章 材料与方法

第三章 结果

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述

附录

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致谢