磁珠法分选CD34细胞及不同来源CD34细胞某些特性比较

摘要

目的：探讨免疫磁珠法分选骨髓CD34+细胞的方法，比较不同因素和条件对免疫磁珠法分选CD34+细胞的影响，提高其分选纯度，寻求一种最佳的分选条件。了解胚胎与成人骨髓CD34+细胞某些特性，为某些骨髓CD34+细胞试验提供新的对照组来源。
　　 方法：应用密度梯度离心法分离人骨髓单个核细胞，用免疫磁珠法分选骨髓CD34+细胞，对其分选过程中相关环节：磁珠与MNC孵育温度，摇床的种类以及红细胞裂解液的使用等不断改进。根据以上几个影响因素分为以下4组：
　　 1、磁珠与MNC在冰块上水平摇床轻轻摇动孵育30分钟，加入分离液(DETACHaBEAD)常温下水平摇床上轻轻摇动45分钟，分选出CD34+细胞；2、在组1基础上，用碎冰盒替代冰块进行磁珠与MNC孵育；3、在组2基础上，用万向摇床替代水平摇床；4、将分出的MNC中预先加入红细胞裂解液裂解残留红细胞，按组3步骤分选CD34+细胞。台盼蓝染色法检测细胞活性，通过流式细胞仪检测分选出的CD34+细胞纯度。按组4步骤分选胚胎和成人骨髓CD34+细胞，RT-PCR检测RUNX1、Hes-1、SLC9A3R1、Notch1、Notch2、HLA-C、PDCD1、PKC-βⅠ的mRNA表达水平。
　　 结果：免疫磁珠法分选过程中，在改进不同环节后，CD34+细胞纯度由32.7±6.6％升至84.5±5.2％，分选纯度逐渐升高，各组间差异有显著性意义(P＜0.05)，其细胞活性均保持在90％左右。
　　 胚胎骨髓CD34+细胞RUNX1、Hes-1、SLC9A3R1、Notch1、Notch2、HLA-C、PDCD1和PKC-βⅠ的mRNA表达水平与成人组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论：碎冰盒、万向摇床及红细胞裂解液的使用能有效地提高免疫磁珠法分选骨髓CD34+细胞的纯度，免疫磁珠法可以作为分选造血干细胞的理想方法。
　　 胚胎骨髓CD34+细胞具有与成人骨髓CD34+细胞相似的某些特性，可以作为一些实验中正常对照使用。

目录

文摘

英文文摘

前言

声明

第一章 材料与方法

第二章 结 果

附 图

第三章 讨 论

第四章 结 论

参考文献

综 述 造血干细胞体外扩增的影响因素

个人简历

致 谢