钠离子通道阻滞剂对兔膝关节软骨细胞骨架的影响

摘要

目的：利用激光扫描共聚焦显微镜(laser confocal scanning microscope,LCSM)观察被钠离子通道阻滞剂作用后的兔软骨细胞骨架(cytoskeleton,CSK)形态，并对软骨细胞CSK蛋白荧光强度进行定量测定，观察钠软骨细胞离子通道阻滞与非阻滞时CSK形态及蛋白量的差异，以了解软骨细胞钠离子通道被阻滞后是否会引起细胞骨架形态学变化，从细胞水平探讨关节软骨退变机制。
　　 方法：雄性2月龄新西兰白兔2只，空气栓塞处死动物，无菌条件下分离双膝关节软骨细胞并行单层培养，将软骨细胞分为两组即干预组和对照组，干预组加入1mL含有0.1mmol/L利多卡因的DMEM培养液，对照组加入1mL普通DMEM培养液。将两组细胞均置于37℃、饱和湿度、5％CO2的孵箱中培养，每3d换液1次，倒置显微镜下观察，两周后进行免疫荧光固定，利用免疫荧光抗体分别对两组软骨CSK蛋白成分微管蛋白、肌动蛋白和纽蛋白进行荧光染色后，利用LCSM观察两组软骨细胞CSK形态；利用荧光强度测定软件对两组软骨细胞CSK蛋白荧光强度进行测定。
　　 结果：软骨细胞微管在核周呈放射状散向整个细胞，形成松散并相互交织的贯穿胞浆的网状结构，胞质内荧光强度较均一；干预组软骨细胞在细胞核周围形成的局部微管交织较对照组增多。肌动蛋白呈丝状，分布于细胞质外围靠近细胞膜处，沿细胞轮廓排列走行，而在核周则无微丝分布；纽蛋白呈斑点状，位于微丝靠近细胞膜的末端；肌动蛋白在干预后有变细甚至消失的趋势，而纽蛋白较干预组无明显变化。对两组软骨细胞CSK蛋白荧光强度定量测定结果发现，对照组及干预组微管蛋白的荧光强度值分别为71.61±10.94、71.78±8.85，两组比较无统计学差异(P＞0.05)；对照组及干预组肌动蛋白的荧光强度值分别为57.43±7.12、50.11±8.91，两组比较有统计学差异(P＜0.05)。
　　 结论：兔膝软骨细胞钠离子通道被阻滞两周后CSK形态学有改变；与对照组软骨细胞相比，干预组软骨细胞肌动蛋白含量有统计学意义的减少；CSK形态及蛋白量均发生明显改变，这提示钠离子通道状态与细胞骨架形态学变化有关。

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结论

参考文献

·综述一：软骨细胞骨架研究进展

·综述二：骨转换生化标志物及其应用研究进展

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