tPNS对hBMSCs诱导分化后神经元样细胞生长状态及凋亡的影响

摘要

目的：研究三七总皂苷(tPNS)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)分化为神经元样细胞过程中的诱导、抗凋亡作用及作用剂量。
　　 方法：hBMSCs 取自健康成年志愿者，全骨髓贴壁法分离、培养、扩增、纯化hBMSCs，流式细胞仪检测hBMSCs表面的CD29、CD44、CD105、CD34分子，并测定细胞周期。取第3代hBMSCs，含20％胎牛血清的1mmol/L β-巯基乙醇(β-ME)预诱导24h，继而用20ng/mLbFGF（标准对照组）、1.0mg/mL tPNS（药物组）、20ng/mL bFGF+(0.5 mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL) tPNS（低、中、高剂量联合组）诱导液诱导，设立空白对照组。采用免疫细胞化学法鉴定神经细胞特异性抗原标记神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋-2(MAP-2)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达；MTT 法检测各组诱导剂不同时间点对神经元样细胞活力的影响，TUNEL、Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒测定诱导后各组细胞凋亡率。
　　 结果:1、成功分离培养出hBMSCs，流式细胞仪检测表面标记为：CD29(+)、CD44(+)、CD105(+)、CD34(-)，分离培养的细胞符合hBMSCs表型特征；测定细胞周期示：高比例的G0/G1期细胞提示hBMSCs 具有高度分化潜能；
　　 2、免疫细胞化学法测定诱导后细胞：联合组NSE、MAP-2阳性细胞比例高于空白对照组、标准对照组及药物组（P<0.05)，且bFGF与药物联合组各组之间随着药物剂量的增加神经元样细胞特异性标志物阳性率也增加（P<0.05)，GFAP表达阴性；
　　 3、MTT测定诱导后细胞活力示：联合组细胞的活性较对照组高（P<0.05)，联合组间随着药物剂量的增加细胞活性也增高（P<0.05)，且细胞活性高、存活时间延长。
　　 4、分别用TUNEL、Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒检测诱导后各组细胞凋亡率，诱导后联合组细胞凋亡率明显下降（P<0.05)，且联合组中随着药物剂量的增加凋亡率随之下降（P<0.05)。
　　 结论：1、tPNS与bFGF 均可诱导hBMSCs分化为神经元样细胞，联合组更能有效诱导使其表达神经细胞表面特异性抗原，且细胞活力较好，与药物剂量呈正相关；
　　 2、tPNS与bFGF 诱导hBMSCs分化为神经元样细胞后增殖能力强，联合组诱导后细胞增殖能力及活力更强，存活时间明显延长，与药物剂量呈正相关；
　　 3、tPNS与bFGF 诱导hBMSCs分化为神经元样细胞后凋亡率下降，tPNS与bFGF 联合诱导可明显减少神经元样细胞凋亡率，与药物剂量呈负相关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略语(abbreviation)

声明

前言

第一章hBMSCs 的分离培养、传代培养及鉴定

第二章hBMSCs 定向诱导分化、鉴定及活力的测定

第三章hBMSCs 凋亡的测定

讨论

结论

参考文献

附图

综述骨髓间充质干细胞的生物学特征及中药三七总皂苷对其的影响

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