血管紧张素-(1-7)与血管紧张素II对巨噬细胞NPC1表达及胆固醇外流的影响

摘要

目的:
　　 以THP-1源性巨噬细胞为研究对象，研究血管紧张素-(1-7) [Ang-(1-7)]与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对C型1类尼曼-匹克蛋白(NPC1)表达及胆固醇流出率的影响，阐明Ang-(1-7)对AngⅡ在胆固醇逆转运方面的拮抗作用。
　　 方法:
　　 1、体外培养的人THP-1单核细胞经佛波酯(PMA)诱导48小时,使之分化为巨噬细胞
　　 2、实验分组：本实验分两部分
　　 1)实验一AngII对THP-1源巨噬细胞NPC1表达及胆固醇流出率的影响
　　 ①空白对照组培养液中不加干扰因素；②AngII10nmol/L；③AngII100nmol/L；④AngII1000nmol/L；⑤AngII10000nmol/L。
　　 2)实验二Ang-(1-7)与AngII对THP-1源巨噬细胞NPC1表达及胆固醇流出率的影响
　　 ①对照组培养液不加干扰因素；②AngⅡ组：加入AngⅡ1000nmol/L；③ Ang-(1-7)组：加入Ang-(1-7) 1000nmol/L；④ AngⅡ+Ang-(1-7)组:分别用Ang-(1-7)100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L 预处理30min后,再加入AngⅡ1000nmol/L；⑤AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组：先用1000nmol/L A-779预处理30min后，再用终浓度为1000nmol/L Ang-(1-7)预处理30min,最后加入终浓度1000nmol/L AngⅡ。
　　 3、运用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blotting分别检测各组NPC1mRNA与NPC1蛋白表达的变化。
　　 4、[3H]胆固醇标记巨噬细胞，经过不同药物干预后，应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。
　　 结果:
　　 1、正常细胞生长良好， 单核细胞呈圆型、悬浮生长， 诱导转化时加入佛波酯(PMA)160nmol/L，诱导分化48h，细胞变为贴壁生长，形态不规则，伸出伪足。
　　 2、与对照组相比，血管紧张素Ⅱ能下调THP-1源性巨噬细胞C型1类尼曼-匹克蛋白mRNA与蛋白质的表达，减少巨噬细胞内胆固醇流出（P＜0.05)，并呈浓度依赖性。
　　 3、与对照组相比，AngⅡ能引起THP-1源性巨噬细胞NPC1mRNA与蛋白质表达的下调及胆固醇流出的减少（P＜0.05)；Ang-(1-7)使NPC1蛋白和mRNA表达升高，胆固醇流出增多（P＜0.05)；混合刺激组中,不同浓度的Ang-(1-7) （100～10000nmol/L)呈剂量依赖性地增加AngⅡ抑制的THP-1源性巨噬细胞NPC1蛋白和mRNA的表达，促进细胞胆固醇流出，与AngⅡ组相比差异有统计学意义（P＜0. 05)；加入A-779组与AngⅡ组比较无显著差异(P＞
　　 0.05)。
　　 结论:
　　 1、AngII可明显抑制巨噬细胞C型1类尼曼-匹克蛋白的表达，减少巨噬细胞内胆固醇流出并呈浓度依赖性。
　　 2、Ang-(1-7)可显著促进巨噬细胞C型1类尼曼-匹克蛋白的表达，增加巨噬细胞内胆固醇流出，
　　 3、Ang-(1-7)可减轻AngII抑制巨噬细胞表达C型1类尼曼-匹克蛋白表达及胆固醇流出的作用，并呈浓度依赖性。
　　 4、Ang-(1-7)合用其特异性受体拮抗剂A-779，Ang-(1-7)所诱导的上述作用减弱，表明Ang-(1-7)的上述作用是通过其特异性受体Mas介导的。

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结论

参考文献

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综述 C型尼曼-匹克蛋白1与细胞胆固醇逆转运

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