地西泮减弱大鼠离体胸主动脉环肌源性收缩的作用及其机制

摘要

目的:观察地西泮(diazepam,DZP)对成年大鼠离体胸主动脉环静息张力的影响,对氯化钾(KCl)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)预收缩血管环的舒张作用,并观察不同工具药对DZP减弱大鼠离体胸主动脉环肌源性收缩的作用,探讨其可能的机制。
　　 方法:采用离体血管张力的实验方法。将大鼠击昏,开胸取出胸主动脉,置4℃的生理盐溶液(physiological salt solution,PSS)中,将其两端固定,仔细剔除周围脂肪组织,剪成长度约2～3 mm的血管环。将血管环用两根不锈钢微型挂钩从管腔穿过,水平悬挂在浴管内,下方固定,上方以一细钢丝连于张力换能器,经PowerLab计算机生物信号采集分析系统记录血管环的张力变化。浴管内含有通以100％O2、pH值为7.4、37℃的PSS,前负荷调为2 g,平衡1 h后开始实验。观察DZP对NE(10-6mol／L)、KCl(30 mmol／L)诱发的成年大鼠离体胸主动脉环收缩作用的影响,并观察一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L—NAME,10-4mol／L)、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(indometacin,10-5mol／L)、外周型苯二氮卓受体(peripheral benzodiazepine receptor,PBR)拮抗剂PK11195(10-6mol／L)、内向整流钾通道(Kir)阻滞剂氯化钡(BaCl2,10-3mol／L)、钙激活钾通道(KCa)阻滞剂四乙胺(TEA,10-2mol／L)、电压依赖性钾通道(KV)阻滞剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP,10-3mol／L)和ATP敏感性钾通道(KATP)阻滞剂格列本脲(glibenclamide,Gli,10-5mol／L)对DZP作用的影响。
　　 结果:(1)DZP(10-7～3×10-4 mol／L)对静息状态下的血管环无明显舒张作用(P>0.05)。(2)DZP(10-7～3×10-4 mol／L)对KCl诱发的成年大鼠离体胸主动脉环产生浓度依赖性的舒张作用。成年内皮完整组:EC50为(2.46±1.06)×10-5mol／L,Emax为(117.20 ±6.67)％；成年去内皮组:EC50为(3.80 ±0.90)×10-5mol／L,Emax为(121.32 ±8.14)％；去内皮组与内皮完整组比较,DZP对KCl预收缩的血管环的舒张作用无统计学差异(P>0.05)。(3)DZP(10-7～10-4 mol／L)对NE诱发的成年大鼠离体胸主动脉环有浓度依赖性的舒张作用。成年内皮完整组:EC50为(4.03 ±0.42)×10-6mol／L,Emax为(101.48 ±5.57)％；成年去内皮组:EC50为(5.46 ±0.45)×10-6mol／L,Emax为(103.42±5.38)％；成年去内皮组与内皮完整组比较,DZP对NE预收缩的血管环的舒张作用无统计学差异(P>0.05)。(4)在KCl预收缩血管环的基础上,分别加入相应浓度的L-NAME、Indo、PK11195、TEA、4-AP、Gli和BaCl2,血管张力发生变化,当血管张力再次达坪值后分别加入DZP(3×10-5mol／L),与对照组比较,L—NAME、TEA、Gli和BaCl2可显著降低DZP舒张血管的作用(P<0.05),Indo、4-AP和PK11195则均无显著影响(P>0.05)；当血管张力再次达坪值后分别加入DZP(3×10-4 mol／L),与对照组比较,L-NAME和TEA可使DZP舒张血管幅度增高(P<0.05),4-AP、BaCl2、Indo、PK11195和Gli则均无显著影响(P>0.05)。(5)在NE预收缩血管环的基础上,分别加入相应浓度的L—NAME、Indo、PK11195、TEA、4-AP、Gli和BaCl2,血管张力发生变化,当血管张力再次达坪值后分别加入DZP(10-6mol／L),与对照组比较,L-NAME、TEA、4-AP、Gli、BaCl2可降低DZP舒张血管的作用(P<0.05),Indo和PK11195则无明显影响(P>0.05);当血管张力再次达坪值后分别加入DZP(10-4 mol／L),与对照组比较,TEA、4-AP、BaCl2使DZP舒张血管的幅度增大(P<0.05),L-NAME、Indo、PK11195、Gli则均无显著影响(P>0.05)。
　　 结论:(1)DZP对成年大鼠离体胸主动脉环的静息张力无显著影响,对KCl和NE预收缩的成年大鼠离体胸主动脉环有浓度依赖性的舒张作用。(2)低浓度的DZP减弱大鼠离体胸主动脉环肌源性收缩的作用具有内皮依赖性,与内皮产生的NO有关,但与PGI2的合成无关。(3)DZP减弱大鼠离体胸主动脉环肌源性收缩的作用与PBR无关。(4)低浓度DZP减弱大鼠离体胸主动脉环肌源性收缩的作用与血管平滑肌钾通道有关。(5)高浓度DZP减弱大鼠离体胸主动脉环肌源性收缩与内皮以及钾通道均无关。