微管蛋白破坏对软骨细胞代谢功能的影响

摘要

目的：探讨微管蛋白破坏对体外关节软骨细胞代谢功能的影响。
　　 方法：2月龄新西兰大白兔8只,处死后取双膝关节全层软骨,采用常规0.4％Pronase酶和0.025％Ⅱ型胶原酶依次消化为软骨细胞培养3天贴壁后,分为对照组和实验组,对照组继续用原代培养基（90％DMEM/F12+10％胎牛血清）培养,实验组在原代培养基中加入微管蛋白破坏剂秋水仙素（终浓度为0.1μmol/l）。加药后第1、2天用Annexin-Ⅴ/PI 流式细胞术检测软骨细胞早期凋亡率,加药后第6天细胞爬片HE 染色观察细胞形态的改变,加药后第3、6、9天取细胞用实时定量荧光反转录聚合酶链式反应（ReAlt ime RT-PCR）法测定软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖以及MMP-13 mRNA的表达量。
　　 结果：实验组第2天软骨细胞早期凋亡率明显高于对照组(P<0.05)；与对照组比较,实验组第6天软骨细胞呈不规则多角形,胞核深染且分裂相增多,细胞基质减少,实验组第3、6、9天软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达量较对照组均明显降低(P<0.05),第6、9天实验组软骨细胞MMP-13mRNA表达较对照组明显增高（P<0.01）。
　　 结论：微管蛋白破坏可致软骨细胞早期凋亡,导致体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖等基质成分合成减少,炎性因子MMP-13的表达增多。

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