大鼠脑挫伤后血栓调节蛋白的时序性表达

摘要

目的：应用酶联免疫吸附ELISA 法、免疫组织化学SABC 法检测大鼠脑挫伤后血浆及脑组织中血栓调节蛋白（TM）的表达变化规律，以期为法医学实践中推断脑损伤时间提供科学的参考依据。
　　 方法：选取64只健康成年SD大鼠，雌雄不限，体重270±10g(由山西医科大学实验动物中心提供)，随机分为实验组（N=56)及对照组（n=8)，实验组依据挫伤时间不同再分为7个亚组。均实施腹腔麻醉后，实验组动物参照Feeney’s法，采用模拟自由落体装置于颅骨中线旁3mm 处造成脑挫伤模型，通过常规HE染色认定挫伤部位及挫伤程度，对大鼠脑挫伤后7d内继发脑损伤的病理学改变及TM的分布特征进行光镜观察，同时分别于挫伤后1h、4h、8h、12h、24h、3d、7d 七个时间点(n=8)取大鼠心血5ml，低温离心后留取血浆，置于-70℃保存备用；取挫伤处脑组织100mg，制作成蜡块保存备用。对照组仅进行手术、钻孔等同样处理，但不受打击，其余处理与实验组相同。应用酶联免疫吸附方法检测脑挫伤后血浆中TM的时序性变化，对检测结果进行统计学分析；应用免疫组织化学SABC 法观察挫伤部位血管内皮中TM 含量的时序性变化，结合图像分析技术及统计学分析进行结果分析，观察上述指标与挫伤时间的关系。
　　 结果：两种方法统计结果显示：(1)大鼠脑挫伤后TM在血浆中的表达
　　 于伤后4h 开始出现升高， 24h 达到峰值，随后血浆中含量逐渐减少，3d后仍有少量表达但仍高于对照组，7d后表达基本恢复至接近对照组水平；(2) 脑挫伤后挫伤部位血管内皮中TM表达呈现出与血浆中相同变化规律。
　　 结论：大鼠脑挫伤后血浆和脑组织中TM表达随着挫伤时间呈规律性变化，可望用于法医学鉴定及早期法医学损伤时间推断。酶联免疫吸附实验技术与免疫组织化学技术操作简单易行，适合法医学研究及检案的需要。

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