环孢素A(CsA)对体外培养人系膜细胞增殖的影响机制的研究

摘要

目的：
　　 1、观察环孢素A(CsA)对人系膜细胞增殖、细胞周期的影响,及对细胞周期相关蛋白cyclinD1、cyclinE、p27kip1表达的影响;
　　 2、初步探讨CsA对人系膜细胞增殖的影响机制。
　　 方法：
　　 3、7℃恒温水浴箱中复苏冻存的系膜细胞,并将细胞移入50ml培养瓶中置于37℃、5％C02培养箱中培养。当系膜细胞生长至80％贴壁时,传代并继续培养,传至3-4代后,细胞活力较强,用于实验。
　　 分实验组和对照组,实验组加入不同浓度CsA(0.1,1,5μmol/L),对照组不加CsA处理。第一步实验:用MTT法在490nm波长处检测不同浓度的CsA分别作用24h、48h、72h后的吸光度值,观察药物对系膜细胞增殖抑制作用。第二步实验:不同浓度的CsA作用48h后,采用流式细胞仪检测细胞周期Go/Gi(DNA合成前期)与S(DNA合成期)的影响。第三步实验:不同浓度的CsA作用48h后,提取细胞蛋白,Westemblot法检测细胞中cyclinD1、cyclinE、p27kip1蛋白表达情况。
　　 结果：
　　 1、不同浓度CsA作用24h,48h,72h后,随着CsA浓度的增加及时间的延长,人系膜细胞的增殖抑制越来越明显;与对照组相比,各浓度均有明显抑制作用,且不同药物浓度均以72h抑制作用最为明显,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 2、CsA可阻滞细胞周期,使Go/Gi期细胞比增多,S期细胞比减少,且随着药物浓度的增加,Go/Gi期所占百分比逐渐增高,S期所占百分比逐渐降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 3、系膜细胞经CsA处理48h后,Westom印迹检测结果显示:与对照组相比,各实验组cyclinDl、cyclinE蛋白表达下降、p27kip1蛋白表达升高;且实验组随CsA浓度的增加,cyclinDI、cyclinE蛋白表达递减、p27kiP1蛋白表达递增,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1、环孢素A能有序地阻滞体外培养人肾小球系膜细胞的细胞周期,明显地抑制其增殖。
　　 2、环孢素A可下调系膜细胞中cyclinD1,cyclinE蛋白表达、上调p27k'p1蛋白的表达。
　　 3、环孢素A抑制人肾小球系膜细胞增殖,其机制至少部分与下调cyclinD1,cyclinE蛋白、上调p27k'p1蛋白的表达,调节细胞周期调控通路有关。

目录

声明

摘要

主要缩略词表

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1 HMC形态学表现

2 HMC增殖活性的测定及细胞生长曲线

3 不同浓度CsA对HMC增殖抑制作用

4 CsA对系膜细胞周期的影响

5 环孢素A对cyclinD1、cyclinE、p27kip蛋白表达的影响

讨论

结论

综述

参考文献

作者简介

致谢