RNA用于体液鉴别的方法学建立及其法医学应用研究

摘要

目的：
　　 为了对犯罪现场体液斑迹同时进行组织来源和个体识别的鉴定，建立一种准确、灵敏、快速的新方法。本文从基因表达的组织特异性入手，筛选出包括外周血、月经血、精液、阴道分泌物、唾液在内的常见体液特异性的mRNA标识，通过RNA判断体液来源以及DNA进行个体识别。
　　 方法：
　　 根据实验要求，分别收集外周血、月经血、精液、阴道分泌物、唾液样本；比较并确立同时提取RNA和DNA的方法；选取了用于体液组织来源识别的7对引物，扩增产物在300bp以下，片段长度相似则采用不同荧光标记用以区分，统一了扩增条件，使7对引物可以在相同参数下扩增，用毛细管凝胶电泳法对RNA逆转录扩增产物和DNA扩增产物进行检验；应用所建立的方法分别通过对外周血、月经血、精液、唾液、阴道分泌物进行验证。
　　 结果：
　　 1、确定采用TRIzol(R)法进行RNA和DNA的同时提取。
　　 2、根据目标样本的序列，筛选多对引物，探索优化扩增体系，使扩增条件能够同时满足多对引物的需要。
　　 3、对外周血、月经血、精液、阴道分泌物、唾液样本进行验证，均得到可靠结果。
　　 4、五种体液除了均表达管家基因18S、GAPDH外，外周血表达SPTB;月经血表达MMP-7、SPTB、HBD-1;精液表达PRM-2;阴道分泌物表达HBD-1；唾液表达STATH。
　　 结论：
　　 1、本课题所建立的是一种对体液判别有效、实用的方法。
　　 2、根据RNA在不同类型、功能的细胞或组织中的表达模式存在差异，确立通过检测RNA表达水平来进行体液组织来源鉴别的方法。提取RNA进行组织来源鉴定的同时进行DNA个体识别的检验。
　　 3、采用RNA作为研究目标进行体液识别的标识，为此研究领域提供了一个新的思路。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 体液组织来源判别及个人识别的方法学建立

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 通过检测组织特异性mRNA来鉴别体液

1 材料

2 方法

3 RNA逆转录产物电泳结果检测

4 讨论

[参考文献]

综述

致谢