Hep G2、Bel-7402细胞裸鼠皮下移植性肝癌模型的实验研究

摘要

肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，其中肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是肝癌中最常见的类型，占到病例总数的70％~80%。为了深入研究肝癌的发病机理，探索新的治疗方法，建立科学的肝癌动物模型是实验的关键。
　　本课题拟通过比较HepG2、Bel-7402两种人肝癌细胞在不同条件下行裸鼠皮下移植时成瘤率的不同，以及两种细胞成瘤后肿瘤形态、肿瘤体积变化规律及AFP表达方面的差异，从中选择一种合适的肿瘤细胞，并探索其最佳的成瘤条件，为进一步实验提供数据。
　　目的：
　　1．比较HepG2、Bel-7402两种人肝癌细胞在不同条件下行裸鼠皮下移植时成瘤率与成瘤潜伏期的差别。
　　2．比较HepG2、Bel-7402两种细胞荷瘤鼠皮下肿瘤生长速度的差别，并归纳其肿瘤增长规律。
　　3.比较HepG2、Bel-7402两种细胞荷瘤鼠肿瘤大体形态学差异，检测血清AFP浓度并做肿瘤组织的病理、免疫组化分析。
　　方法：
　　1．将90只BALB/c裸鼠按照肿瘤细胞悬液的浓度及鼠龄随机平均分成9组，其中8组分别皮下注射HepG2细胞和Bel-7402细胞，第9组为对照组。比较HepG2、Bel-7402这两种人肝癌细胞在不同条件下成瘤率与成瘤潜伏期的差别。
　　2．HepG2、Bel-7402两种细胞裸鼠皮下成瘤后每周用游标卡尺测量瘤体大小。肿瘤体积的计算公式V=πab2/6（V：体积，a：肿瘤长径，b：肿瘤短径）。
　　3．裸鼠成瘤后，利用化学发光法检测裸鼠血清AFP浓度，观察HepG2、Bel-7402两种细胞形成的裸鼠皮下肿瘤大体形态的差异，将切下的肿瘤组织行免疫组化法检测AFP及HepPar1表达。
　　结果：
　　1.当HepG2细胞悬液浓度达到5.0×107/ml，4~8周龄和8~12周龄的裸鼠均能得到很高的成瘤率（均为100%）。而对于Bel-7402细胞，细胞悬液浓度必须达到5.0×107/ml，且仅在4~8周龄的裸鼠皮下注射才能得到较高的成瘤率（80%）。
　　2.HepG2、Bel-7402两种细胞在同等条件下裸鼠个体间的出瘤时间并不恒定，HepG2细胞平均成瘤时间为19.4±5.2天；而Bel-7402细胞平均成瘤时间为34.3±15.7天。
　　3.HepG2细胞裸鼠皮下肿瘤的典型表现为多发的节结样突起，肿瘤组织内部由多个白色的节结样团块组成。Bel-7402细胞皮下肿瘤的表面则为较平滑，肿瘤组织内部周边较韧，瘤体中心则主要是豆腐渣样坏死组织。
　　4.两种细胞荷瘤鼠成瘤后第4周查血清AFP均阴性。免疫组化检测HepG2细胞肿瘤HepPar1表达呈阳性、Bel-7402细胞肿瘤HepPar1表达呈阴性；而两种细胞AFP表达均为阴性。
　　结论：
　　1．建立裸鼠肝癌动物模型时，HepG2细胞较Bel-7402细胞更易裸鼠皮下成瘤。
　　2．HepG2细胞较Bel-7402细胞成瘤潜伏期更短，并且成瘤后肿瘤增长速度更快。
　　3．HepG2细胞、Bel-7402两种细胞AFP表达均呈阴性。

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前 言

第一部分Hep G2、Bel-7402两种人肝癌细胞在不同条件下裸鼠皮下移植性肝癌模型成瘤结果分析

材料与方法

结 果

讨 论

第二部分Hep G2、Bel-7402两种人肝癌细胞荷瘤鼠血清AFP浓度及其肿瘤组织的病理、免疫组化分析

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

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