晚期非小细胞肺癌肿瘤组织原发灶和淋巴结转移灶c--MET基因扩增的研究

摘要

目的: 1.利用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测147例晚期（TNM分期Ⅲ、Ⅳ期）非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)原发灶和与原发灶配对的71例淋巴结转移灶（即该71例转移灶与原发灶取自同一患者）中c-MET基因扩增的阳性率，并对比两者基因扩增的一致性，进而探讨用NSCLC淋巴结转移灶替代原发灶检测c-MET基因扩增的可行性，为NSCLC的c-MET基因扩增检测提供一种备选方案，以便临床上不易取得原发灶的NSCLC患者能够安全、方便、准确、及时的得到c-MET基因检测结果并接受相应的分子靶向药物治疗。 2.通过Real-Time PCR方法检测147例晚期NSCLC原发灶和71例配对淋巴结转移灶的c-MET基因扩增情况，结合NSCLC患者相应基线资料，分析c-MET基因扩增与NSCLC患者性别、年龄、吸烟情况及病理类型等之间的关系。 方法: 1.收集2011年11月到2013年11月北京军区总医院、山西医科大学附属医院、中国人民解放军第一附属医院、浙江省肿瘤医院4个三级甲等医院经病理科确诊为晚期NSCLC患者的原发灶手术标本或穿刺标本147例，其中71例配对淋巴结转移灶标本，另收集正常肺组织标本47例作为对照组。并整理所有患者的基线资料，包括患者性别、年龄（高龄组、低龄组）、吸烟情况及病理类型。 2.使用Real-Time PCR检测所有标本c-MET基因扩增情况，得出中国部分NSCLC人群c-MET基因扩增阳性率。 3.使用SPSS19.0分析原发灶与淋巴结转移灶c-MET扩增的一致性、c-MET扩增阳性与临床基线资料间的关系。 结果: 1.NSCLC患者c-MET基因扩增阳性率 经检测NSCLC患者的原发灶组织c-MET基因扩增阳性率为8.84％(13/147)。 2.NSCLC患者原发灶与配对淋巴结转移灶c-MET基因扩增的差异性比较 c-MET扩增阳性率配对原发灶为8.45％(6/71)，配对淋巴结转移灶为18.31％(13/71)。配对的71对原发灶、转移灶组织中，原发灶扩增阳性6例，转移灶扩增阳性13例，转移灶扩增阳性而对应的原发灶扩增阴性8例，原发灶扩增阳性而对应的转移灶扩增阴性1例，淋巴结转移灶扩增阳性率高于原发灶，两组间差异有统计学意义（McNemar检验，p=0.039）。 3.NSCLC患者原发灶与配对淋巴结转移灶c-MET基因扩增的一致性比较 原发灶和淋巴结转移灶两组间c-MET基因扩增阳性率有统计学差异，淋巴结转移灶的阳性率较原发灶有所升高。用淋巴结转移灶预测原发灶c-MET扩增阳性，其一致性良好（kappa=0.464，p＜0.001），通过淋巴结转移灶判断原发灶扩增情况，灵敏度为83.3％(5/6)，特异度为87.7％(57/65)。这说明淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率的升高基于原发灶的扩增情况，它可能是对原发灶扩增情况的一个放大。 4.NSCLC患者原发灶和淋巴结转移灶c-MET基因扩增与临床特征的关系 (1)147例NSCLC原发灶当中，c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为10.6％和7.1％(p=0.489)，在高龄（≥60岁）和非高龄（＜60岁）两个亚组当中分别为7.1％和11.3％(p=0.372)，在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为12.8％和3.1％(p=0.213)，在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为4.2％和10.1％(p=0.362)，均无统计学差异。即在NSCLC原发灶当中c-MET基因扩增与性别、年龄、吸烟情况及病理类型无关。 (2)71例NSCLC配对原发灶当中，c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为8.6％和8.3％(p=1.000)，在高龄和非高龄两个亚组当中分别为7.3％和10.0％(p=0.692)，在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为12.1％和3.6％(p=0.142)，在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为4.0％和10.9％(p=0.414)，均无统计学差异。即在配对的71例NSCLC原发灶当中c-MET基因扩增与性别、年龄、吸烟情况及病理类型无关。 (3)71例NSCLC配对转移灶当中，c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为28.6％和8.3％(p=0.035)，在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为28.2％和6.3％(p=0.029)，差异均存在统计学意义。在高龄和非高龄两个亚组当中分别为17.6％和23.3％(p=0.371)，在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为8.0％和23.9％(p=0.414)，差异均无统计学意义。即在NSCLC配对转移灶当中c-MET扩增在男性、吸烟患者明显升高:出现N2以上淋巴结转移患者的淋巴结转移灶组织中，男性为28.6％(10/35)存在扩增，吸烟患者为28.2％(11/39)存在扩增，其中男性吸烟患者为30.4％(7/23)存在扩增。 结论: 1.参与本次实验中国人群NSCLC患者的肿瘤组织原发灶中c-MET基因扩增阳性率为8.84％，较国外文献报道偏高，与国内报道的阳性率并不一致，但本次结果在国内报道阳性率的范围内，由此预测中国人群c-MET基因扩增率高于欧美人群。考虑到针对c-MET基因扩增的分子靶向药物治疗可以使近十分之一的NSCLC患者获益，故c-MET基因扩增检测应当同EGFR、EML4-ALK等共同作为NSCLC的常规基因检测项目。 2.NSCLC淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率高于原发灶，考虑到淋巴结转移灶扩增阳性率的升高基于原发灶的扩增情况，发生淋巴结转移能够放大原发灶的扩增情况，将发生轻度扩增而未达到检测阈值的患者检出，从而筛出更多具有分子靶向药物治疗适应症的患者。既往经验证明，无论是原发灶还是转移灶出现基因突变，都可作为分子靶向药物治疗的适应症。综上所述，用淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增检测，效果优于原发灶的检测。 3.本次研究当中发现c-MET基因扩增在原发灶与基线资料无关，但在淋巴结转移灶男性患者高于女性患者，吸烟患者高于不吸烟患者，提示对于存在N2级以上淋巴结转移的男性吸烟患者，c-MET基因扩增检测对其有非常重要的临床诊疗价值，对于这类型的患者，如果有可能，均应对其淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增的检测。

目录

声明

摘要

缩略词表(Abbreviation)

前言

第一章 材料和方法

1．1 主要仪器及试剂

1．1．1 主要仪器

1．1．2 主要试剂

1．2 研究对象和方法

1．2．1 研究对象

1．2．2 研究方法

1．2．3 结果分析

1．3 统计学处理

第二章 结果

2．1 入组病例临床基线资料整理分析

2．2 NSCLC石蜡包埋原发灶及淋巴结转移灶组织提取DNA浓度检测结果

2．3 原发灶与淋巴结转移灶c-MET基因扩增检测结果

2．4 c-MET基因扩增与临床基线资料的关系

第三章 讨论

结论

参考文献

文献综述 非小细胞肺癌分子靶向治疗新靶点c-Met的研究进展

个人简历

致谢