羟基丁酸--羟基辛酸聚合物复合胶原在软骨组织工程支架材料的检测

摘要

背景:组织工程技术出现至今已有30余年，这项技术标志着器官再造时代的到来，为人类带来了人造器官的曙光，是一种新兴的综合性交叉学科。其研究领域涵盖了临床医学、材料学、基础医学等多个科学领域，作为其重要部分的软骨组织工程技术近年来已获得一些突破性的进展，但目前在支架材料、种子细胞的选择以及支架制备技术等方面还有很多问题待解决，仍有很漫长的道路要走。 方法:针对上述问题，本文采用课题组自主研发的羟基丁酸-羟基辛酸聚合物(PHBHOx)为主体材料，复合材料选用Ⅰ型胶原，混合材料采用溶剂浇铸-颗粒沥滤的方法制备软骨组织工程支架，对支架的各种性能进行检测和评估，并进行体外与软骨细胞的复合培养，以检测复合材料的各项性质，以期能够寻找解决上述问题的方法。 结果与讨论:我们以羟基丁酸-羟基辛酸聚合物作为主体材料，按质量分数复合不同比例(2％，4％，6％，8％，10％)的胶原，采用溶剂浇铸-颗粒沥滤法制备组织工程支架。通过扫描电镜观察材料内部结构及孔径大小，液体位移法测定材料孔隙率。以兔软骨细胞作为种子细胞，体外进行传代扩增培养，根据镜下染色观察及生长曲线，选择增殖性强及生物学特征稳定的P1代软骨细胞作为种子细胞。将羟基丁酸-羟基辛酸聚合物/胶原支架、羟基丁酸-羟基辛酸聚合物支架分别与兔软骨细胞进行体外复合培养，MTT法测定细胞的生长曲线，扫描电镜观察细胞在材料上的生长黏附情况。研究结果显示，羟基丁酸-羟基辛酸聚合物/胶原复合软骨组织工程支架孔径大小200μ m左右，孔隙率为(85±2)％，细胞亲水性随加入胶原比例的增加而升高。与羟基丁酸-羟基辛酸聚合物支架比较，不同比例的羟基丁酸-羟基辛酸聚合物/胶原支架可明显促进软骨细胞的黏附、增殖。证实羟基丁酸-羟基辛酸聚合物/胶原复合支架具备更好的细胞亲和性。上述研究结果表明，以羟基丁酸-羟基辛酸聚合物为主体材料，Ⅰ型胶原作为复合材料构建的软骨组织工程支架能够极大的对材料进行互补并提升支架的各项性能并基本满足软骨组织工程对支架的要求。

目录

声明

摘要

缩略词

第一章 前言

1．组织工程的建立

2．软骨组织工程

2．1 软骨组织工程支架材料

2．2 软骨组织工程种子细胞

2．3 软骨组织工程支架制备技术

本文研究目的

第二章 PHBHOx／胶原软骨组织工程支架的制备

1 材料和方法

1．1 实验材料

1．2 PHBHOx／胶原软骨组织工程支架的制备

2 结果

3 讨论

本章小结

第三章 兔软骨细胞的分离、培养

1 材料和方法

1．1 主要试剂与仪器

1．2 实验动物

1．3 兔软骨细胞的分离培养

1．4 兔软骨细胞传代培养

2 结果

2．1 细胞显微镜下观察

2．2 生长曲线

3 讨论

本章小结

第四章 细胞-支架复合体培养

1 材料和方法

1．1 主要试剂与仪器

1．2 支架-细胞体外复合培养

1．3 MTT法检测细胞在支架上的增殖活性

1．4 统计学处理

2 结果

2．1 细胞-支架复合体电镜下观察

2．2 细胞在支架上增殖的MTT法检测

3 讨论

本章小结

结论

参考文献

综述 软骨组织工程的最新进展

附录

个人简介

致谢