2个miniSTR基因座等位基因分型标准物的制备及其遗传多态性研究

摘要

目的：在常规法医学DNA检验中，STR遗传标记具有遗传多态性高、检测方法简单等特点，因此在法医学个人识别和亲权鉴定中被广泛使用。然而，在实际检案时常会面临各种由于物理、化学、生物等因素所导致的微量物证或腐败检材，应用STR试剂盒进行检测时，常不能得出结论，这就给案件的及时侦破带来困难。miniSTR技术是通过重新设计出靠近核心重复序列的引物，使整个扩增产物缩短到150bp左右，极大地提高了对降解检材的检出率。在将miniSTR技术应用于法医学分析时，需要一套精确的、国际标准化命名的等位基因分型标准物。本研究拟采用分子克隆技术制备miniSTR D3S4529和D12ATA632个基因座的等位基因分型标准物，同时将自制的标准物应用到中国汉族人群中，研究其群体遗传学参数，并对此方法制备的标准物应用于法庭科学实践中的价值和意义进行评价。 方法：筛选、分离目的基因座的所有等位基因片段，将其插入到pMD18-T Vector中，导入大肠杆菌，1.1％的琼脂糖凝胶电泳筛选阳性克隆，将阳性克隆进行扩大培养后，获得每个等位基因片段的重组质粒。用荧光标记引物PCR扩增，ABI3130XL遗传分析仪分型验证后，再经测序证实插入片段的结构及大小，对插入的等位基因片段按照国际法庭血液遗传学会标准(International Society ofForensic Haemogenetics，ISFH)进行命名。以含有正确插入片段的质粒为模板，混合各基因座等位基因重组质粒，制备出等位基因分型标准物，并用自制的miniSTR D3S4529和D12ATA63等位基因分型标准物对中国汉族人群样本进行群体遗传学分析。 结果：用此方法成功制备了目的基因座的等位基因分型标准物，测序证实其核心重复序列分别为(ATCT)m+(ATTT)n、(TAA)m+(CAA)n。对835名中国汉族人群的遗传多态性研究中，miniSTR D3S4529基因座检出7个等位基因，分别为12、13、14、15、16、17和18; miniSTR D12ATA63基因座检出11个等位基因，分别为11、12、13、14、15、16、17、18、19、20和21，经x2值检验，其等位基因频率分布与Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)相吻合，2个miniSTR基因座的杂合度分别为0.752、0.723，多态信息含量分别为0.71、0.71。 结论：应用分子克隆技术制备等位基因分型标准物，是一种实现等位基因分型标准化的可行方法。将自制的标准物应用到中国汉族人群中，研究表明，miniSTRD3S4529和D12ATA63基因座在中国汉族人群中具有高度遗传多态性，因此可考虑在个人识别和亲权鉴定等案件中应用，miniSTR D3S4529和D12ATA63是2个适合法庭科学研究的遗传标记。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1．实验材料、仪器和试剂

1．1 实验材料

1．2 主要仪器

1．3 主要试剂

1．4 主要试剂的配制

2．方法

2．1 分子克隆引物设计思路

2．2 目的等位基因的筛选

2．3 目的等位基因的分离

2．4 目的等位基因的回收

2．5 目的等位基因的克隆

2．6 重组质粒的验证

2．7 等位基因分型标准物的制备

2．8 统计学分析

2．9 将自制的等位基因分型标准物应用于亲子鉴定案例

结果

讨论

结论

参考文献

综述 miniSTR技术的研究进展

附录

攻读学位期间发表文章情况

致谢

个人简历