亚低温干预下新生大鼠缺氧缺血性脑损伤COX--2基因表达变化及意义

摘要

目的:新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE)是指围产期缺氧缺血所致的脑损伤，是新生儿死亡和儿童期伤残的主要原因。本实验研究首先建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)动物模型，再使用亚低温(mild hypothermia)干预处理，通过观察HIBD及亚低温干预后脑组织形态变化及检测各组各时间点大鼠脑组织环氧化酶-2(Cycloxygenase-2，COX-2)基因含量表达的变化来探讨亚低温的脑保护作用及可能的作用机制，为临床应用亚低温防治新生儿缺氧缺血性脑损伤提供客观依据。 方法:120只7日龄SD大鼠，采用Rice法建立新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型，随机分为三组，假手术组(n=40)、常温组(n=40)、亚低温组(n=40)，假手术组麻醉后切开颈部皮肤，分离不结扎左侧颈总动脉;常温组麻醉后切开颈部皮肤，分离结扎左侧颈总动脉后置于缺氧舱中2h，再放置于34℃的暖箱中（肛温37℃）接受治疗到结束;亚低温组在缺氧缺血2h后立即给予亚低温干预，将大鼠放入半导体水浴箱的玻璃缸，使水温稳定在30℃（肛温33℃）并维持至治疗结束。每组又根据处死时间的不同分为1h、6h、12h、24h、48h五个亚组，用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction，RT-PCR)在mRNA水平检测新生大鼠COX-2mRNA表达，对各组各时间点脑组织COX-2mRNA的含量进行统计学分析。 结果:(1)缺氧缺血性脑损后新生大鼠表现出异常的行为能力。(2)假手术组新生大鼠脑组织外观正常，无明显变化;常温组新生大鼠脑组织，1h未见明显变化，6h可见轻度水肿，12h左侧脑组织可见水肿及少量局灶性坏死，24h、48h脑组织水肿明显，出现不同程度萎缩;亚低温组与常温组各时间点相比，双侧脑组织大小基本正常，无明显萎缩、液化及坏死。(3)假手术组COX-2mRNA表达甚微，且各组之间无明显变化;常温组COX-2mRNA表达6h开始上调且逐渐增加，24h含量达高峰，24h-48h维持在高峰(P＜0.05);亚低温组各组COX-2mRNA表达与常温组各时间点比较相对表达均降低(P＜0.05)。 结论:(1) HIBD模型新生大鼠在行左颈总动脉结扎并放入低氧环境后全部发生不同程度的行为异常改变，说明造模成功。(2)新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后，假手术组及亚低温组脑组织水肿程度较常温组明显减轻，假手术组COX-2mRNA表达甚微，且各组之间无明显变化;常温组和亚低温组COX-2活性都有不同程度的增加，常温组COX-2mRNA表达6h开始上调且逐渐增加，24h含量达高峰，亚低温组各组COX-2mRNA表达与常温组各时间点比较相对表达均降低，这些结果表明，亚低温能减少大鼠脑缺血再灌注后COX-2等炎症介质的生成及表达，延长损伤细胞存活时间，对HIBD的脑组织具有确切的保护作用，且早期（于COX-2开始上调之前）积极亚低温治疗对于脑保护是有一定作用的。

目录

声明

摘要

前言

材料与设备

1 实验材料

2 实验过程

3 统计学分析

结果

4．1 行为观察

4．2 脑组织标本外观

4．3 COX-2mRNA统计学分析结果

讨论

1．HIBD模型的建立

2．HIBD时COX-2表达变化

3 COX-2在HIBD中的作用机制

结论

参考文献

附图

文献综述 HIF-1α及COX-2在缺氧缺血性脑损伤中的研究进展

攻读学位期间发表论文情况

致谢

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