汉防已甲素联合伊马替尼对K562/G01细胞凋亡及相关机制的研究

摘要

目的：伊马替尼(Imatinib，IM)，第一代酪氨酸激酶抑制剂，是治疗慢性粒细胞白血病(chronic mycloid leukemia，CML)的临床一线用药，但随着其耐药的出现，寻找低毒、有效，且能克服IM耐药或增敏IM作用的药物是众多学者研究热点。 汉防己甲素(Tetrandrine，Tet)是一种从防己科植物-粉防己的块根中提取的生物碱，是天然性的非选择性的钙通道阻滞剂，同时又是钙调蛋白的拮抗剂。在体外和体内的研究表明，汉防己甲素是一种广谱肿瘤抑制剂，可选择性地诱导肿瘤细胞凋亡。本课题旨在研究Tet和IM单独及联合应用对耐伊马替尼的慢性粒细胞白血病急变期K562/G01细胞株的增殖抑制、诱导凋亡的作用，并初步探讨其可能的诱导凋亡的机制。 方法： 1.MTT法检测IM、Tet单药及联合用药对细胞增殖抑制作用的影响; 2.流式细胞术(FCM)检测各实验组细胞周期及细胞凋亡率; 3.实时荧光定量PCR检测各组细胞caspase-3、bcl-2基因的表达量; 4.Western Blot分析各组细胞caspase-3、bcl-2蛋白的表达。 结果： 1.MTT法检测结果示:不同浓度(0-24μ mol/L)的Tet分别作用于K562/G01细胞24h、48h，均能明显抑制细胞的增殖，其作用具有时间-浓度依赖性，各浓度组间有显著性差异(P＜0.05)，Tet对K562/G01细胞24h、48h的IC50值分别为(10.83±0.76)μmol/L、(7.53±0.32)μmol/L。同样不同浓度(0-10μmol/L)的IM对K562/G01细胞的增殖抑制作用也具有时间-浓度依赖性。两药联合作用后对K562/G01细胞48h的抑制作用明显高于Tet、IM单药组，差异具有统计学意义（P均＜0.05）。 2.流式细胞术(FCM)检测细胞周期结果示:Tet、IM单独用药后K562/G01细胞呈G1期阻滞，联合用药后其阻滞作用更为明显(P＜0.05)。 3.流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率结果示:Tet单独作用于K562/G01细胞48h对早期和晚期凋亡率有一定的影响，并呈浓度依赖性。单独应用1μmol/LIM对细胞凋亡作用不明显，联合1.5μmol/L、3μmol/L的Tet能明显提高IM对K562/G01细胞的凋亡作用(P＜0.05)。 4.实时荧光定量PCR检测结果示:经Tet1.5μmol/L、3μmol/L，IM1μmol/L处理K562/G0148h后，在细胞中caspase-3的相对表达量与对照组相比明显增加，联合用药组作用更明显，差异有统计学意义(P＜0.05)。细胞经相同处理后bcl-2的相对表达量逐渐减低，两药联合后差异具有显著性(P＜0.01)。 5.Western blot结果示:与对照组相比，1μ mol/L IM和1.5μ mol/L Tet的单药组分别作用于K562/G01细胞48h后，各组细胞中caspase-3、bcl-2蛋白的表达变化不太明显，联合用药后能使bcl-2蛋白的表达明显减低，而caspase-3蛋白的表达显著增高。 结论： 1.Tet单药组及联合IM用药组对K562/G01细胞均有明显的增殖抑制作用，并且呈时间-浓度依赖性，且联合用药组作用更强，提示Tet有增敏IM的作用; 2.Tet单药组及联合IM用药组可以诱导K562/G01细胞的凋亡，且联合用药组凋亡作用更显著，可能与影响细胞周期有关。 3.Tet单药组与联合IM用药组能上调caspase-3基因的mRNA及其蛋白的表达水平、下调bcl-2基因的mRNA及其蛋白的表达水平，这可能是Tet诱导K562/G01细胞凋亡作用的机制之一。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

前言

第一章 材料与方法

第二章 实验结果

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献

附表

附图

综述 汉防己甲素抗肿瘤机制的最新研究进展

作者简历

致谢