RNA干扰MuRF1基因延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩

摘要

目的：
　　研究通过慢病毒转染RNAi技术介导的Muscle RING finger1（MuRF1）基因阻断或下调来延缓大鼠丧失神经后出现的骨骼肌萎缩的疗效。为临床上因失去神经支配导致骨骼肌发生萎缩问题的研究及治疗奠定实验基础。
　　方法：
　　日龄为43-55天，选种属为SD大鼠，称空腹重量为192-202g的大鼠40只，随机分为注射50μL重组慢病毒载Lenti．GFP-MuRF1（即注射干扰基因组）实验组共计20只，和注射Lenti．GFP溶液50μL（即注射空载体组）对照组20只。切断并翻转缝合大鼠左侧髋部处的坐骨神经，制造左趾长伸肌丧失神经支配的模型。造模型后按组别于失神经趾长伸肌注射干扰基因与空载体量均为50μL，注射后满一周与三周时，每个时间点两组大鼠分别取6只，完整显露起止点后切除左侧趾长伸肌，于荧光显微镜下观察绿色荧光信号。分别于二百倍显微镜与2万倍电镜观察肌细胞超微结构，检测肌肉总蛋白含量，测肌肉湿重维持率，实时定量PCR检测MuRF1基因，比较不同时间点的大鼠趾长伸肌肌细胞横截面积。
　　结果：
　　转染后1和3周，两组趾长伸肌中均可观察到大量GFP荧光信号。转染后1周实验组的肌湿重维持率、肌细胞横截面积、趾长伸肌肌肉总蛋白含量分别为(90.87±4.56)％、(943.53±24.27)μ㎡和(94.18±2.53)(mg／mL)均明显高于对照组(75.73±6.21)%、(753.43±23.41)μ㎡和(72.54±2.45)(mg／mL)，差异均有统计学意义( P均<0．05)。RT-PCR检测实验组MuRF1基因与对照组相比明显下调（P<0.05）。转染后3周，上述各指标分别为（84.37±6.24）%、（851.30±20.34）μ㎡和（81.37±2.84)(mg／mL)，仍高于对照组，对照组各指标为（50.42±5.01）%、（643.75±21.90）μ㎡（59.72±3.62)(mg／mL)（P均<0.05）。超微结构显示，术后1周实验组退变的细胞核均少于对照组，核质染色均匀。3周镜下可见对照组肌丝肌节排列紊乱，Z线明显紊乱，甚至中断。
　　结论：
　　RNA干扰的MuRF1（肌环指蛋白-1）基因下调能够使大鼠失去神经的骨骼肌萎缩进程明显的延缓。

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前言

材料与方法

1.1 实验动物与分组

1.2 主要试剂及仪器

1.3 主要实验仪器及耗材：

1.4 切断、翻转支配趾长伸肌的神经模型

1.5载体注射

1.6 标本提取

1.7 肌肉湿重维持率

1.8 透视电镜标本制作

1.9 转染效率检测

1.10 肌细胞横截面积

1.11 肌肉标本蛋白含量测定

1.12 RT-PCR检测

1.13 统计学方法

结果

2.1转染效率检测结果

2.2 肌湿重维持率

2.3 肌纤维横截面积测定

2.4 肌纤维超微结构变化

2.5 肌肉蛋白质含量

2.6 MuRF1基因的RT-PCR检测

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述: MuRF1基因在骨骼肌萎缩进程中的研究进展

在学期间发表的学术论文与研究成果

致谢

个人简历