P物质调控肥大细胞脱颗粒的一种新的机制的研究

摘要

目的：
　　利用体外诱导小鼠骨髓细胞获得的高纯度肥大细胞，探讨IL-4参与诱导获得的肥大细胞NK-1R和FcεRⅠα的表达情况；建立神经肽P物质介导的肥大细胞脱颗粒模型，初步探讨P物质除通过其特异受体NK-1R调控肥大细胞脱颗粒外是否还存在FcεRⅠα介导的途径。
　　方法：
　　1.从Balb/c小鼠股骨提取骨髓细胞，分不同浓度IL-4诱导组即100ng/ml干细胞因子（stem cell factor，SCF）、15ng/ml IL-3以及0，10,15,20,25ng/ml IL-4进行体外培养。每周换液，将悬浮细胞移入新的培养体系。倒置显微镜观察并记录细胞生长情况。
　　2.四周后收集各组细胞及上清液，进行甲苯胺蓝染色、流式细胞术检测CD117鉴定肥大细胞，流式细胞术以及Western Blotting分析不同组骨髓肥大细胞FcεRⅠα和NK-1R表达情况。
　　3.经鉴定培养成功的骨髓肥大细胞中分别加入不同浓度P物质（0、0.01、0.1、1、10μg/ml）孵育半小时，检测上清液和细胞内组胺含量，计算组胺释放率。
　　结果：
　　1.不同浓度IL-4诱导组（100ng/ml SCF、15ng/ml IL-3以及0，10,15,20,25ng/ml IL-4）均可诱导获得肥大细胞。
　　2.其中SCF、IL-3和IL-4共同诱导组获得的肥大细胞FcεRⅠα和NK-1R的表达高于单纯SCF和IL-3组（0 ng/ml IL-4诱导组）；而20ng/mlIL-4诱导组肥大细胞表面FcεRⅠα和NK-1R表达达最佳状态。
　　3.20ng/mlIL-4诱导组肥大细胞可被低浓度P物质（0.01μg/ml）激活进而发生脱颗粒，其组胺释放率与SP浓度呈正相关；0 ng/ml IL-4诱导组肥大细胞表达FcεRⅠα但是几乎不表达NK-1R，此时在高浓度SP（1μg/ml）作用时肥大细胞仍可产生应答。
　　结论：
　　初步验证P物质调控肥大细胞脱颗粒存在其特异受体NK-1R介导的非免疫性以及FcεRⅠα介导的免疫性双途径，为下一步研究肥大细胞脱颗粒机制奠定基础，从而为变应性及非变应性炎性疾病的诊治提供新思路。

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前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结 果

2.1 鉴定骨髓肥大细胞

2.2 比较各组细胞表面CD117、FcεRⅠα以及NK-1R的表达情况

2.3 MC脱颗粒情况

3 讨 论

参考文献

综述: 神经肽P物质研究进展

致谢

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