转化生长因子β1联合生长分化因子-5体外诱导骨髓间质干细胞向类髓核细胞分化的实验研究

摘要

目的：
　　探讨转化生长因子β1联合生长分化因子-5体外诱导骨髓间质干细胞向类髓核细胞分化的可能性。
　　方法：
　　取SD大鼠骨髓间质干细胞，采用流式细胞术对两种干细胞CD105、CD90、CD44、CD29、CD45、CD34、CD24的表达进行检测。将增殖至第三代的BMSCs分为对照、TGF-β1、GDF-5、TGF-β1+ GDF-5四组，分别以含不同细胞因子诱导液培养14d后，采用RT-PCR检测各组细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9基因的表达。
　　结果：
　　两种干细胞CD105、CD90、CD44、CD29表达阳性； CD45、CD34、CD24表达阴性。TGF-β1、GDF-5、TGF-β1与GDF-5三组的Collagen typeⅡ、Aggrecan、SOX-9基因表达水平较对照组均有明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。联合诱导组经过诱导后的Collagen typeⅡ、Aggrecan、SOX-9基因表达水平明显高于TGF-β1组及GDF-5组，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　GDF-5与TGF-β1都具有诱导BMSCs向类髓核细胞分化的能力，且二者之间具有协同作用，联合应用可以更好的诱导骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化。

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前言

1 材料与方法

1.1主要试剂

1.2 主要仪器设备

1.3 主要工作液配制

1.3.1 SD大鼠骨髓来源干细胞类髓核细胞诱导培养液成分：

1.3.2 1×PBS缓冲液

1.3.3 1×TBS

1.3.4 TBST（0.05%/0.1%/0.15%）

1.3.5 细胞冻存液

1.4细胞培养

1.4.1 BMSCs的分离与培养

1.4.2 细胞的冻存与复苏

1.4.3 细胞计数方法

1.5 流式细胞术进行表面免疫表型鉴定

1.6向类髓核细胞诱导分化方法

1.6.1 SD大鼠骨髓来源干细胞成软骨分化不完全培养液配置方法

1.6.2 不完全培养液配置方法

1.6.3 BMSCs向类髓核细胞诱导分化方法

1.7 SYBR green法荧光定量PCR分析

1.8 统计学处理

2 结 果

2.1干细胞的分离与培养

2.2干细胞的鉴定

2.3细胞外基质相关基因的表达

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述:骨髓间充质干细胞及影响其向类髓核细胞转化的生物因子的作用研究进展

致谢

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果

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