增龄对小鼠肺纤维化模型端粒酶活性影响的研究

摘要

目的：
　　通过对青年小鼠及老年小鼠的肺纤维化过程中E-钙粘蛋白(E-Cadherin, E-Cad)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)及端粒酶逆转录酶（TERT）的表达水平进行研究，对比不同年龄的小鼠肺纤维化模型病变的程度及端粒酶活性的高低，研究增龄对小鼠肺纤维化程度及纤维化过程中端粒酶活性变化的影响。
　　方法：
　　将50只20周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为两组，其中25只小鼠作为青年组，另外25只饲养25周作为老年组，将青年组及老年组再随机分成对照组(n=5)及博来霉素（BLM）造模组(n=20)。对照组气管注入0.9％氯化钠注射液于第28天处死，留取左肺；博来霉素造模组小鼠平均分为四组，每组5只，分别在气管注入博莱霉素稀释液（5mg/kg）的第7、14、21、28天处死，留取左肺标本。对肺组织进行HE染色及Masson染色，观察小鼠肺纤维化模型是否造模成功。运用肺组织石蜡切片免疫组化染色法，对可反映小鼠肺纤维化病变程度的上皮细胞标志蛋白 E-钙粘蛋白(E-Cadherin, E-Cad)，间质细胞标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)及可反映端粒酶功能活性的指标端粒酶逆转录酶（TERT）进行平均灰度值检测，对比各项指标在青年小鼠和老年小鼠的对照组与造模组间的差异，结果分析采用独立样本量t检验统计分析法并对其进行相关性分析。
　　结果：
　　小鼠肺组织石蜡切片HE染色及Masson染色结果表明气管注入BLM诱导小鼠肺纤维化模型成功。老年小鼠肺纤维化病变程度较青年小鼠严重。
　　在模型组中，与青年组相比，E-Cadherin在老年组中表达少（P<0.05）；与对照组相比，模型组中 E-Cadherin表达均减少(P<0.05)，且随造模时间延长而减少（P<0.05）。在模型组中，与青年组相比，α-SMA、Vimentin在老年组中表达增多（P<0.05）；与对照组相比，模型组中α-SMA、Vimentin表达增加（P<0.05），且随造模时间延长而增多（P<0.05）。与青年组相比，TERT在老年组中表达率波动范围大，其阳性率随时间变化先升后降（P<0.001），于第14天达到最高峰处，28天降回第7天程度。
　　结论：
　　气管注入BLM（5mg/kg）诱导小鼠肺纤维化模型成功，老年小鼠普遍比青年小鼠肺病变程度严重。肺纤维化过程中，E-钙粘素(E-Cadherin, E-Cad)表达下降，α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(Vimentin)表达升高，端粒酶的逆转录酶（TERT）功能先升后降。老年小鼠端粒酶活性波动值比青年小鼠波动值大，增龄可通过影响小鼠肺纤维化模型中端粒酶的活性来改变肺纤维化病变程度。

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前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1实验对象

1.1.2主要试剂及溶液配置

1.1.3主要仪器

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型的建立、分组及标本采集

1.2.2 肺组织的常规病理染色

1.2.3 肺组织E-Cadherin、α-SMA、Vimentin及TERT的免疫组化染色

1.2.4 计算机图像分析

1.2.5 统计学分析

2 结 果

2.1 肺组织的病理变化

2.1.1 肺组织石蜡切片HE染色

2.1.2 肺组织石蜡切片Masson染色

2.2 肺组织E-Cadherin、α-SMA、Vimentin及TERT的免疫组化染色结果

2.2.1 肺组织E-Cadherin免疫组化染色结果

2.2.2 肺组织α-SMA免疫组化染色结果

2.2.3 肺组织Vimentin免疫组化染色结果

2.2.4 肺组织TERT免疫组化染色结果

2.3 E-Cadherin、α-SMA、Vimentin及TERT表达相关性

3 讨 论

3.1 小鼠肺纤维化模型的病理染色

3.2 青年小鼠与老年小鼠肺纤维化病变程度对比

3.3 增龄对小鼠肺纤维化模型中端粒酶活性的影响

4 结 论

参考文献

综述:增龄对小鼠肺纤维化模型端粒酶活性影响的研究

致谢

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