中介素对大鼠肾小球内皮细胞缺氧损伤的保护作用

摘要

目的：
　　探究中介素（Intermedin, IMD）对大鼠肾小球内皮细胞（rRGEC）缺氧损伤的影响及其可能的机制。
　　方法：
　　（1）实验分组：将rRGEC传代培养，选取生长状态良好的细胞,随机分成正常组（N组），缺氧组(H组)及IMD组, N组置于二氧化碳培养箱内（5％CO2、37℃）培养，H组与IMD组置于三气培养箱内（90%N2、5%CO2、5%O2、37℃）缺氧培养,按培养液中IMD的最终浓度将IMD组分为10-8mol/L（IMD1组）、10-7mol/L（IMD2组）、10-6mol/L（IMD3组）。6h后留取各组细胞及其培养液用于检测。（2）相差显微镜下观察细胞形态学特点。（3）流式细胞术分析细胞凋亡率。（4）Elisa法检测细胞上清液中4-羟壬烯醛（4-HNE）、活性氧（ROS）及超氧化物歧化酶（SOD）含量。（5） tanswell聚碳酸酯膜小室内制备内皮细胞单层，并测其底室与顶室FITC-BSA荧光强度，以底室与顶室荧光强度比值的变化来表示细胞通透性变化。（6）实时定量PCR检测各组细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF) mRNA的相对表达量。（7）免疫细胞化学法检测细胞HIF-1α及VEGF蛋白的表达并进行半定量分析。
　　结果：
　　（1）细胞形态学改变：相差显微镜下，N组细胞生长状态良好，无悬浮死亡细胞；H组细胞肿胀、悬浮死亡细胞较多；与H组相比，IMD1、IMD2、IMD3组细胞损害均减轻，悬浮死亡细胞较少，与N组接近。（2）细胞凋亡率的变化：与N组相比，IMD1、IMD2、IMD3组细胞凋亡率降低（P<0.05）；与H组相比，IMD1、IMD2、IMD3组细胞凋亡率均降低(P<0.05)。（3）培养液上清中4-HNE、ROS、SOD的含量：与N组相比，H组细胞培养液上清中4-HNE、ROS升高，SOD降低(P<0.05)；与H组相比，IMD1、IMD2、IMD3组细胞培养液上清中4-HNE、ROS降低，SOD升高(P<0.05)。（4）细胞通透性的改变：与N组相比，H组transwell聚碳酸酯膜小室的底室与顶室FITC-BSA荧光强度比值增加，细胞通透性增加（P<0.05）；与H组相比， IMD1、IMD2、IMD3组transwell聚碳酸酯膜小室的底室与顶室FITC-BSA荧光强度比值降低，细胞通透性降低(P<0.05)。（5） HIF-1αmRNA及蛋白的相对表达量：与N组相比，H组HIF-1αmRNA及蛋白相对表达量增高(P<0.05)；与H组相比，IMD2组HIF-1αmRNA及蛋白相对表达量增高(P<0.05)。（6）VEGFmRNA及蛋白的相对表达量：与N组相比，H组VEGFmRNA及蛋白相对表达量增高(P<0.05)；与H组相比， IMD2组VEGFmRNA及蛋白相对表达量增高(P<0.05)。（7）相关分析发现HIF-1αmRNA、VEGFmRNA相对表达量与细胞凋亡率呈较强负相关（r1=-0.919， r2=-0.911，P<0.05）。
　　结论：
　　中介素可使缺氧损伤的细胞形态改善且细胞通透性降低，脂质过氧化物产生减少，细胞凋亡减轻，因此减轻了缺氧损伤，进而保护了肾小球内皮细胞，与其上调HIF-1α与VEGF生成有关。

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前言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 实验方法

2 结 果

2.1 细胞形态学改变

2.2 细胞凋亡率的变化

2.3细胞通透性的改变

2.4 细胞培养液上清中缺氧相关产物含量

2.5 HIF-1α及VEGFmRNA及蛋白在肾小球内皮细胞的表达

2.6 Pearson相关分析

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述: 肾小球内皮细胞在慢性肾脏病进展中的作用

致谢

在学期间参与的科研课题与研究成果

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