HIV派生的新型miRNA99对巨噬细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β和吞噬功能的影响

摘要

目的:
　　探讨HIV派生的新型miRNA99对巨噬细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β及其吞噬功能的影响。
　　方法:
　　用佛波酯（PMA）刺激人单核细胞白血病细胞（THP-1）分化成贴壁的巨噬细胞，倒差显微镜下观察细胞形态并用流式细胞术测定CD11b并鉴定为巨噬细胞。将鉴定好的巨噬细胞进行分组（分为对照组、LipidA组、miRNA-TAR组、miRNA99组），采用转染试剂将化学合成的miRNAs瞬时转染至巨噬细胞内或用LipidA作用巨噬细胞，用人TNF-α、IL-6、IL-1βELISA试剂盒测定细胞上清液TNF-α、IL-6、IL-1β的水平。采用共聚焦显微镜观察巨噬细胞吞噬荧光标记的大肠杆菌的情况。将各组已吞噬荧光标记的大肠杆菌的巨噬细胞制成单细胞悬液，用流式细胞术检测各组细胞的吞噬率。
　　结果:
　　1.未经PMA刺激的THP-1细胞呈单个悬浮状态，圆形或类圆形，葡萄串样聚集；经PMA刺激后细胞贴壁生长，细胞伸出伪足，呈梭形或多边形，表明THP-1基本分化为巨噬细胞。
　　2.经PMA刺激24小时后细胞表面CD11b阳性率在99％以上，说明THP-1细胞已大部分分化为巨噬细胞，可以用于后期的实验。
　　3.LipidA组与miR99组Mφ培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量均明显高于对照组（p<0.05），有统计学差异。但miR-TAR组与对照组无明显差异（p>0.05）。而且miR99组较LipidA组TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显升高，p<0.05，有统计学差异。
　　4.巨噬细胞胞浆内呈现绿色荧光，说明巨噬细胞已吞噬荧光标记的大肠杆菌。
　　5.各组巨噬细胞吞噬细菌的能力不同，经miRNA99刺激的巨噬细胞吞噬细菌的能力较对照组明显降低。前期研究已证明内毒素能抑制巨噬细胞的吞噬功能。从上图中得出，miRNA99组较LipidA组吞噬率降低明显，说明miRNA99对巨噬细胞吞噬功能的损害较内毒素更明显。
　　结论:
　　1.miRNA99使巨噬细胞释放TNF-α、IL-6、IL-1β增多；
　　2.miRNA99使巨噬细胞的吞噬功能下降。