GDF-15基因siRNA干扰质粒和真核表达质粒对人脐静脉血管内皮表达及增殖的影响

摘要

目的：
　　在体外观察人GDF-15基因siRNA干扰质粒和真核表达质粒对人脐静脉血管内皮细胞增殖及表达VEGF、bFGF的影响。
　　方法：
　　构建人GDF-15基因siRNA干扰质粒和GDF-15基因真核表达质粒，分别转染至HUVECs细胞中,实时荧光定量PCR检测 GDF-15基因mRNA的表达水平，筛选出最佳的干扰序列。然后将细胞分为5组:空白对照组、干扰组、干扰对照组、真核表达组、真核表达对照组，用Western blot检测各组细胞GDF-15蛋白的表达情况，并运用ELISA法检测细胞上清液中VEGF、bFGF的含量，流式细胞仪检测细胞周期，了解细胞的增殖情况。
　　结果：
　　1、实时荧光定量PCR结果显示，HSH022853-24-CU6质粒组的mRNA的表达明显低于其它各组，抑制率约为92％，HSH022853-24-CU6为最佳干扰质粒。真核表达组mRNA的表达显著增高，达到其对照组的1000倍，且明显高于其它各组。
　　2、Western blot检测目的蛋白，真核表达组的目的蛋白量最高，且明显高于其它四组，干扰组最低，且明显低于其阴性对照组和空白对照组；
　　3、ELISA结果显示，空白对照组VEGF的表达显著高于其它四组，但真核表达组、干扰组与各自的阴性对照组相比表达量几乎相等，而各组的bFGF几乎测不出；
　　4、流式细胞仪检测细胞周期，进入G2期和S期的细胞比率以真核表达组最高，明显高于空白对照组和干扰组，但是真核表达组、干扰组与各自相应的阴性对照组相比差别不大。
　　结论：
　　对于正常培养的HUVECs，GDF-15基因对血管内皮细胞产生VEGF、bFGF能力和对血管内皮细胞的增殖能力无影响。