抑制HMGB1表达对大鼠脑缺血/再灌注损伤后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

摘要

目的：
　　建立大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注（MCAO/R）模型，使用高迁移率族蛋白1（HMGB1）特异性抑制剂进行干预抑制HMGB1的表达，通过观察神经功能缺损症状、梗死体积评估抑制HMGB1表达后的神经保护作用。通过观察缺血半暗带HMGB1、Bcl-2、Bax的表达情况，探讨抑制HMGB1表达对大鼠脑缺血/再灌注损伤后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。
　　方法：
　　120只健康SD雄性大鼠（体重250-300 g），取其中96只，随机分四组：假手术组、模型组、甘草甜素干预组（GL组）和丙酮酸乙酯干预组（EP组）（每组各24只）。假手术组只分离颈部血管，不闭塞大脑中动脉（MCA）。另三组大鼠均利用可逆性线栓法制备MCAO/R模型，缺血1h后给予再灌注。再灌注1h后，GL组、EP组分别腹腔注射GL(50mg/kg)、EP(50mg/kg)，假手术组、模型组分别腹腔注射等量的生理盐水，间隔12h注射1次。各组再分四个亚组（每亚组各6只)，分别于再灌注后的不同时间点（6h、12h、24h、48h），观察大鼠的行为学表现，并对大鼠进行神经功能缺损评分。然后取脑组织，采用HE染色观察缺血侧脑组织病理学改变，采用免疫组化测定缺血半暗带HMGB1、Bcl-2、Bax阳性细胞的表达情况。另剩余24只，按照以上方法同样分四组（每组各6只)，于缺血1h再灌注24h后，快速断头取脑，采用TTC染色测量脑梗死体积。
　　结果：
　　（1）神经功能缺损评分：与模型组相比，使用GL或EP干预抑制HMGB1表达后，神经功能学评分显著降低，具有统计学意义（p<0.05）。
　　（2）再灌注24h后TTC染色：与模型组相比，使用GL或EP干预抑制HMGB1表达后，梗死体积显著缩小，具有统计学意义（p<0.05）。
　　（3）HE染色：与模型组相比，使用GL或EP干预抑制HMGB1表达后，神经细胞排列较为紧密、整齐，坏死细胞少见。
　　（4）再灌注48h后免疫组化测定HMGB1表达：使用GL或EP干预抑制HMGB1表达后，与模型组相比，缺血半暗带HMGB1表达显著减少，具有统计学意义（p<0.05）。
　　（5）免疫组化测定Bcl-2、Bax表达：缺血1h再灌注48h期间，使用GL或EP干预抑制HMGB1表达后，与模型组相比，抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显增加，具有统计学意义（p<0.05）。促凋亡蛋白Bax表达明显减少，具有统计学意义（p<0.05）。
　　结论：
　　大鼠脑缺血/再灌注后，通过药物干预抑制HMGB1的表达后，可明显改善神经功能缺损症状、缩小梗死体积。抑制HMGB1表达后神经保护作用的发挥与上调的Bcl-2及下调的Bax有关。

目录

声明

常用缩写词中英文对照表

前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

1.1.2 实验试剂

1.2 实验方法

1.2.1实验动物分组

1.2.2制备大鼠局灶性MCAO/R模型

1.2.3神经损伤严重度评估

1.2.4甘草甜素和丙酮酸乙酯的配置和保存

1.2.5 TTC染色

1.2.6 HE染色

1.2.7 免疫组织化学测量HMGB1、Bcl-2、Bax表达

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 各组大鼠神经功能学评分

2.2 TTC染色测定梗死体积

2.3 HE染色观察缺血侧脑组织的病理学改变

2.4再灌注48h后缺血半暗带HMGB1的表达情况

2.5各组大鼠抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况

2.6 各组大鼠促凋亡蛋白Bax的表达情况

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述：高迁移率族蛋白1在缺血性脑损伤中的研究进展

致谢

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