脂联素通过下调Nox2表达减轻急性酒精性心肌损伤

摘要

目的:
　　探讨脂联素（APN）对小鼠急性酒精性心肌损伤的影响并研究相关机制，为急性酒精性心肌损伤及酒精性心肌病的预防和诊治提供实验依据及新思路。
　　方法:
　　取20只健康8周龄SPF级C57BL/6J雄性小鼠，随机分为正常实验组（n=10只）与正常模型组（n=10只）。将8周龄纯合子脂联素基因敲除（APN-/-）雄性鼠（SPF级、近交系C57BL/6J，20只）随机分为APN-/-对照组（n=10只）与APN-/-模型组（n=10只）；各模型组均给予腹腔注射乙醇3g/Kg（体重）·d，各对照组均给予腹腔注射相等量的生理盐水。4组小鼠均正常摄食、饮水，连续3天后进行各项指标检测：观察小鼠一般情况；用动物超声机及小动物专用探头测定心脏结构参数及相关功能指标；检测血清乳酸脱氢酶（LDH）、血浆N尾端B型脑钠肽原（NT-proBNP）；检测心肌组织Casepase-3活力及TUNEL检测心肌组织细胞凋亡；制作心肌组织HE染色及Masson染色切片；制备心肌匀浆，测定MDA、ROS含量及SOD活性；Western blot法测定心肌组织Nox2蛋白表达情况。
　　结果
　　与正常对照组相比，正常模型组射血分数显著下降（P<0.01）；血清LDH、血浆NT-proBNP浓度分别升高了1.98倍、5.13倍（均P<0.01）；HE染色及Masson染色结果示心肌结构紊乱、心肌纤维走向迂曲、断裂，胶原纤维增多，CVF值升高2.63倍（P<0.01）；心肌组织内Casepase-3活性升高了2.58倍（P<0.01），TUNEL法示阳性凋亡心肌细胞增多了12.67倍（P<0.01）；心肌组织内ROS含量、MDA含量分别升高了1.68倍、2.87倍（均P<0.01），SOD活性升高2.92倍（P<0.01）；Nox2蛋白表达量升高1.87倍（P<0.01）。与APN-/-对照组比较，APN-/-模型组射血分数显著下降（P<0.01），其余指标均显著升高（均P<0.01）。与正常模型组比较，APN-/-模型组小鼠射血分数降低更为显著（P<0.01）,血清LDH、NT-proBNP浓度分别升高了1.30倍、1.25倍（均P<0.01）；HE染色及Masson染色示心肌结构紊乱无序、心肌纤维走向迂曲、断裂更加明显、胶原纤维增多明显，CVF值升高了1.55倍（P<0.01）；心肌组织内Casepase-3活性升高1.66倍（P<0.01），TUNEL法示阳性凋亡心肌细胞比例升高1.64倍（P<0.01）；心肌组织内ROS含量、MDA含量分别升高1.42倍、1.39倍（均P<0.01），SOD活性降低28％（P<0.01），Nox2蛋白表达量升高1.44倍（P<0.01）。
　　结论
　　脂联素（APN）可以减轻小鼠急性酒精性心肌损伤，其机制与脂联素抑制心肌组织Nox2表达发挥抗氧化应激作用有关。

目录

声明

常用缩写词中英文对照表

前言

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器

1.2 动物来源、模型建立与实验分组

1.3 心脏超声测定小鼠心功能，测定小鼠血浆LDH、NT-proBNP含量

1.4 标本留取

1.5 心肌组织HE（苏木精-伊红）染色、Masson染色及心肌纤维化计算

1.6 TUNEL法检测心肌细胞凋亡

1.7 制备心肌组织匀浆及测定Casepase-3活性、ROS、MDA含量、SOD活性

1.8 Western blot法检测Nox2蛋白的表达

1.9 统计学分析

2 结果

2.1 小鼠的一般情况

2.3 心肌组织氧化应激相关指标

2.4 各组心肌组织Nox2蛋白表达比较

3 讨论

4 结论

参考文献

综述：抗氧化应激是脂联素发挥心脏保护作用的重要机制

附录

致谢

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